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週報 第 1204 期 知 識 天 地 酵素抑制劑：挑戰高抑制強度與高選擇性以利新藥研發 林俊宏研究員、何靜玟博士班學生（生物化學研究所） 酶，又稱為酵素，是指具有催化功能的蛋白質，在生物體中是具有催化新陳代謝及生合成（biosynthesis ）反應 的蛋白分子；生物體藉著種種酵素的催化作用與調節，才能有效地完成所需要的許多生理活動。若細胞內的酵素活 動受到抑制或干擾，整個生物體就可能出現異狀，所以酵素往往成為開發藥物的重要目標。近年來針對酵素開發的 藥物，如克流感（Tamiflu ）就是治療流行性感冒病毒的藥物，屬於病毒的唾液酸水解酶（Neuraminidase ）的抑制劑 （Inhibitor)。我們的研究團隊近年來所研發的新技術，可以快速找到酵素的最佳抑制劑；此技術已成功應用到醣類 水解酶中，找到抑制強度最高的分子，它的抑制常數 （Inhibition constant: Ki ）達到0.46 pM 。醣類水解酶 （Glycoside hydrolases ），是一種專門水解糖苷鍵（Glycosidic bond ）的酵素，是自然界中常見的酵素之一，生物體中此類酵素通 常扮演代謝與調節的重要角色。 相同的醣水解酶存在於人體的不同區域，甚至同一細胞的不同胞器 （Organelle ） 內，會有不同的角色與功能，另外，也有不同的醣水解酶，即使彼此角色功能不同，但所辨視的受質 （Substrate ） 卻相近。所以在開發抑制劑時，絕大部分的化合物對於類似或同類酵素均會產生多重的抑制行為，使得研究細胞和 生物體的專一酵素的生理角色受到限制，因為這些抑制劑將會引起複雜的表徵 （Phenotypes ）。所以針對單一酵素開 發具有高強度兼具高選擇性的抑制物，是目前藥物研發中的最重要的課題，可以減低對其他相似的酵素產生抑制， 減少或去除不必要的副作用。 我們在數年前首先針對岩藻醣苷水解酶 （α-L-Fucosidase, EC 1 ）進行研究，此酵素是負責催化水解反應 以釋放出岩藻糖（α-L-Fucose ），而所辨視的岩藻糖大部分會透過各種不同的鍵結方式如α-1,2 ，α-1,3 ，α-1,4 ，α-1,6 與 半 乳 糖 （ Galactose ） 或 是N- 乙 醯 葡 萄 糖 胺 （N-acetylglucosamine ）形成鍵結，這些具有岩藻糖修 飾的醣類分子具有各種不同的生理活性，例如人體中 A, B, H, 及 Lewis 抗原的非還原端常常含有岩藻糖修 飾，而這些抗原則是血型分類的重要辦識指標。除此 之外，岩藻糖還涉及植物本身的防禦、人體發炎反應、 細胞凋亡（Apoptosis ）、癌症腫瘤的轉移以及人類基因 遺傳疾病Fucosidosis。 我們研發的方法是利用酵素的催化反應中的過渡 態（Transition state ）為主體，設計並合成它的類似構 造。而醣水解酶抑制劑的主體開發即是將糖分子的氧 環修改成氮糖分子（azasugar ）為主體，接著再以組合 式合成（Combinatorial synthesis ）由環外與各種官能基 圖一 結合造成多元性的組合。我們所發展的化學反應因選擇性及產率很高，可直接在微盤（Microtiter plate ）上進行。反 應後的產物不必經由純化步驟，可以直接以大量連續式的稀釋，降低溶劑干擾後，後續的酵素活性測試也可以繼續 在微盤上進行（圖一）。 此技術的開發可以免除傳統作法上繁瑣的純化步驟，在極短的時間內可以完成眾多化合物的合成，以及後續 酵素活性的篩選，找出最強的抑制劑，因此研發的費用與時間都可以降到最低。整個程序可在幾小時或幾天內完成， 比起傳統的作法省下許多寶貴的時間。這個方法所找到的分子往往專一性極高，不容易對其他類似的酵素產生抑制 效果，在藥物研發上亦可避免副作用的發生。此外，這種方法也可以找到緊密結合型抑制劑（Slow, tight-binding inhibitors ），藉著額外延伸性的基團與標的酵素（Target enzyme ）產生構形改變（Conformational change ），而有更緊 密的結合，因而使結合強度增加數千、萬倍。 另一方面，我們最近幾年與王惠鈞副院長的結構生物學實驗室合作，在與疾病相關聯