蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶纯化及性质3.pdf

动物学报 　43 (2) : 133～139 , 1997 A cta Zoologica S inica 　　　　　　 蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶 纯化及性质 赵小凡　　王金星 ( 山东大学生物学系, 济南　250100) 摘 　要 　采用硫酸铵沉淀、离子交换层析和离子交换凝胶过滤法 , 从蓖麻蚕卵母细胞中纯 化出一种蛋白酶。该蛋白酶活性能被天冬氨酸蛋白酶特异性抑制剂抑胃肽抑制 , 初步鉴定 该酶为天冬氨酸蛋白酶。经 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 90kD , 由凝胶过滤估 计分子量在 360kD , 推测该酶由四亚基组成。该蛋白酶在p H3～5 均可水解牛血红蛋白 , 最 适 p H 为 4 。这是首次报道昆虫卵内存在天冬氨酸蛋白酶。 关键词 　蓖麻蚕 　卵天冬氨酸蛋白酶 　纯化 　性质 昆虫卵内蛋白酶在胚胎发育中降解卵黄蛋白, 供给胚胎发育必需的氨基酸 , 对昆虫 的胚胎发育具有重要的意义。根据活性中心可将蛋白酶分为4 大类 , 分别是半胱氨酸蛋 ( 白酶类、丝氨酸蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类和金属蛋白酶类 Bond and Butler , 1987) 。目前已从昆虫卵内纯化出多种蛋白酶, 如家蚕卵半胱氨酸蛋白酶 ( Kageyama and Takahashi , 1990) 和家蚕卵黄蛋白质降解酶 ( Ikeda et al . , 1990) 。目前所报道的 昆虫卵内蛋白酶分属于半胱氨酸蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类。前者的活性中心含有半胱 氨酸残基 , 酶活性可被 E64{N[ N( 1 ,3transcarboxyoxiran2carbonyl) Lleucyl ]agma tine}抑制 ; 后者活性中心含有丝氨酸残基 , 酶活性可被 iPr PF ( diisoprop yl fluorophos 2 phate) 抑制。目前为止 , 还没有关于昆虫卵内是否存在有天冬氨酸蛋白酶的报道。 在我们对蓖麻蚕卵内半胱氨酸蛋白酶进行研究的过程中发现 , 卵母细胞中的内源性 蛋白酶活性除可被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂 E64 抑制外 , 还可被天冬氨酸蛋白酶 的特异性抑制剂抑胃肽抑制 , 在纯化蓖麻蚕卵半胱氨酸蛋白酶时也发现多个蛋白酶活性 ( ) 峰 , 因此曾推测蓖麻蚕卵内可能存在有天冬氨酸蛋白酶 赵小凡等 , 1994 。现从蓖麻 蚕卵母细胞中纯化出一种蛋白酶 , 由于其活性可被抑胃肽抑制, 初步鉴定该酶为天冬氨 酸蛋白酶类。 1 　材料和方法 11 　动物 　蓖麻蚕 ( Philosamia cynthia ricini) 用蓖麻叶人工饲养 , 取羽化前的剖腹卵洗净备用。 ( ) 12 　化学试剂 　DEAE纤维素 DE52 为 Whatman 公司产品 ; DEAEToyopearl 为日本 Tosoh 公司 产品 ; Sepharose CL6B 和标准蛋白质为 Pharmacia 公司产品 ; 部分抑制剂由 S. Y. Takahashi 教授惠 赠 ; 蓖麻蚕卵黄磷蛋白 ( 分子量 468kD , 刘正廉等 , 1987) 和蓖麻蚕卵半胱氨酸蛋白酶 ( 分子量 收稿 ,修回 国家教