Dead-box RNA解旋酶DDX25及DDX3X在登革病毒感染中的作用.pdfVIP

Dead-box RNA 解旋酶DDX25 和DDX3X 在登革病毒感染中的作用 中文摘要 中文摘要 登革病毒是当今世界分布最广泛的一种虫媒病毒，为单股正链RNA 病毒，主 要由埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。人类、灵长类动物和蚊虫是登革病毒的天然宿主。 人体被登革病毒感染后表现的症状不同，严重的会引发登革出血热和登革休克综 合症甚至死亡。据统计，每年大约新增数百万登革病毒感染。由于登革病毒感染 的机制仍不明确，各血清型之间抗原性存在交叉、存在抗体依赖的增强作用等， 至今仍无安全有效的疫苗可用。 含Dead-box 结构域的RNA 解旋酶DDX 家族属于剪接因子2 解旋酶超家族的 一类，参与了RNA 代谢的多种过程。此外，一些Dead-box RNA 解旋酶被报道能 够参与抗病毒免疫反应。在本研究中，我们采取了 RNAi 文库筛选的方法，研究 40 多个Dead-box 家族成员在登革病毒感染过程中的作用。我们筛选出DDX3X 和 DDX25 作为研究对象，RNAi 结果显示，干扰DDX3X 能够促进登革病毒复制， 而沉默DDX25 能抑制登革病毒复制。 为了进一步研究 DDX3X 的抗病毒作用，我们在 HEK293T 细胞中过表达 DDX3X ，进行登革病毒感染实验。结果显示，登革病毒的复制水平显著降低。RNAi 和过表达的结果说明DDX3X 具有抗登革病毒的功能。进一步研究发现，在登革病 毒感染早期，干扰DDX3X ，IFN- β的表达水平降低；在登革病毒感染的条件下， 过表达DDX3X 后，IFN- β的表达水平显著升高。而且DDX3X 促进了登革病毒诱 导的IRF3 的转录活性及磷酸化和二聚化。同时，我们发现DDX3X 既促进了RIG-I 诱导的NFκB 的转录活性，也促进了登革病毒诱导的NFκB 的启动子活性。因此， 我们得出结论，DDX3X 在登革病毒感染的早期通过IRF3 和NFκB 两条支路促进 了IFN- β的产生，抑制了登革病毒的复制。 不同于之前的文献报道——DDX25 是组织特异性表达的，我们发现 DDX25 在人体多种组织及细胞系中均表达，而且在细胞质和细胞核中均有分布。上皮细 胞感染登革病毒后DDX25 的表达量显著升高。沉默DDX25 能抑制登革病毒复制， 而过表达 DDX25 ，登革病毒的复制水平显著升高。这些结果表明DDX25 能够促 进病毒复制。而对于具体机制的研究发现，在HEK293T 细胞中，干扰DDX25 后， IFN- β的表达水平显著升高；过表达DDX25 后，IFN- β的表达水平显著降低。 I 中文摘要 Dead-box RNA 解旋酶DDX25 和DDX3X 在登革病毒感染中的作用 DDX25 还能抑制SeV,VSV 和polyI:C 诱导的IFN- β的转录。在IFN- β信号通路中， DDX25 抑制由RIG-I，MDA5 ，MAVS ，TBK1 ，IRF3 过表达所诱导的IFN- β的启 动子转录活性，与此同时，DDX25 也抑制了RIG-I ，IKKα 和p65 亚基过表达所 诱导的NFκB 的转录活性。因此，我们得出结论，DDX25 通过IRF3 和NFκB 两条 支路抑制了IFN- β的产生，促进了登革病毒的复制。 本研究首次证实了DDX3X 的抗登革病毒功能；同时，也首次发现DDX25 能 够抑制IFN-β 信号通路，进一步丰富了Dead-box 家族成员在抗病毒天然免疫中所 起到的作用，为抗病毒药物的研究提供了新的靶点。 关键词：登革病毒 DDX25 DDX3X IFN-β 作 者：李广豪 指导老师：戴建锋 II Dead-box RNA