BMSC联全cDNA6IL-12质粒对小鼠乳腺癌治疗作用.pdfVIP

摘要 目的：制备小鼠骨髓问充质干细胞(BMSC)，观察其在体外对小鼠乳腺癌细 胞(EMT一6)生长、凋亡及致瘤性的影响；将BMSC联合白细胞介素一12真核 表达质粒(pcDNA6／IL一12)于乳腺癌荷瘤小鼠瘤体内共同注射，探讨二者联合 应用对荷瘤小鼠的治疗作用。 方法： (1)小鼠BMSC的原代培养及其鉴定：采用差速全骨髓贴壁法培养原 (2) 代小鼠BMSC，采用形态学和成骨诱导茜素红染色钙结节法对其鉴定。 度。作用EMT．6细胞24，48，72h后，CCK一8法检测在不同浓度BMSC条件 V—FITC／7． 培养基的作用下，EMT．6细胞增殖的情况；流式细胞术(Annexin AAD双染色法)检测在BMSC条件培养基培养条件下EMT．6细胞凋亡的情 况。(3)BMSC条件培养基处理过的EMT．6细胞接种昆明种小鼠，于第4、 6、8、lO、12、14、16d测量肿瘤的大小。第17d处死小鼠，取出小鼠肿瘤并 称重，将肿瘤组织制作成石蜡切片，用苏木精．伊红(HE)染色及病理学观 察。 (4)建立小鼠乳腺癌荷瘤模型，待肿瘤直径达到5．8mm(约4d)将小 鼠随机分为4组。分别为阴性对照组(瘤内注射PBS)；BMSC组(瘤内注射 测量肿瘤的长短径，计算肿瘤的大小。第17d处死小鼠，无菌条件下剥取瘤体 和脾脏并称质量，计算脾指数和抑瘤率。MTT法检测脾淋巴细胞的增殖活性， LDH法检测脾淋巴细胞的杀伤活性，HE染色观察肿瘤组织的病理学改变。 结果：(1)成功培养小鼠BMSC，取P3代细胞进行成骨诱导，茜素红染色钙 结节为阳性。 (2)随着BMSC条件培养基浓度的升高以及作用时间的延长， EMT．6细胞的增殖抑制率由(6．84-0．02)％上升到(29．84-0．05)％，凋亡率由 (2．34-0．2)％上升到(25．44-O．3)％。(3)BMSC条件培养基处理的EMT．6 细胞致瘤性明显减弱，肿瘤的体积明显变小(PO．05)。组织病理学观察可见 实验组肿瘤组织大片坏死。 用可导致荷瘤小鼠肿瘤的体积缩小(P0．01)，脾淋巴细胞增生反应及杀伤活 性增强(P0．05)。肿瘤坏死区扩大并且有大量炎性细胞浸润。结果显示 lUlIMIIIIIIIIIIIIIIl Y2589198 好的治疗效果。 结论：本研究成功制备出了小鼠BMSC细胞。体内外研究证明，BMSC对小鼠乳 腺癌细胞EMT．6具有抑制增殖、促进凋亡及降低其致瘤性作用。BMSC与质粒 pcDNA6／IL．12联合应用增强小鼠的抗肿瘤细胞免疫力，发挥更强的抗肿瘤作 用。 硕士研究生：王明翠(病原生物学) 指导老师： 张文卿教授 关键词：小鼠乳腺癌；骨髓间充质干细胞；pcDNA6／IL．-12 The effectofmousebonemarrow—derived therapeutic mesenchymal stemcellscombinedwithIL-12recombinantonmice plasmid breastcancer bearing Abstract f themurinebonemarrow-derivedstemcells Objective1)Toprepare mesenchymal their actiononbreastcancer (BMSC)andinvestigateinhibitory