EMT和其相关因素与大肠癌转移关系的初步研究.pdfVIP

E Ple 七+ 叫八 研究背景 大肠癌是一种常 上升的趋势。转移是癌症治疗中的难点，乃患者死亡的主要原因，因此探讨大 肠癌转移的分子机制，寻找有效的预防和治疗途径是大肠癌研究的重要内容。 transition，EMT)，是指上皮细胞 上皮细胞间质转化态(epithelial．mesenchymal 在特定的生理和病理情况下向问充质细胞转分化的现象，目前EMT被看成导致 肿瘤进展的病理过程，与侵袭和转移有关系。在EMT的过程中，细胞之间的粘 附减少，上皮细胞极性丧失，与周围基质细胞的接触减少，细胞迁移和运动能 力增强，同时细胞表型发生改变，丧失上皮表型，如角蛋白丝，E．钙粘素 钙粘素，a．SMA等。其中E．cadherin水平的下降可以导致细胞的粘附力降低， 使细胞获得易于侵袭和转移的特性，E．cadherin表达的丢失已经被认为是EMT 最显著的特征。目前认为EMT的发生过程是由精确的细胞内信号转导机制调控， 由微环境因子作用于细胞表面特异性受体，将信号转入细胞内，诱导细胞通路 的改变，最终导致基因表达的改变。 Tiaml基因(T invasionand lymphoma metastasis)是从鼠T淋巴瘤中克隆出来 的基因，全称T淋巴瘤侵袭转移诱导因子l。Tiaml几乎在所有的肿瘤细胞中都 中文摘要 表达，但表达水平根据肿瘤细胞侵袭转移能力的不同而不同。其在肺癌、乳腺 癌、卵巢癌、喉癌、结肠癌等多种恶性肿瘤组织中呈阳性表达并与侵袭转移密 切相关。Tiaml对于控制细胞形态、粘附和运动以及信号传导都有重要作用，并 能够诱导肿瘤细胞的侵袭转移。 文献报道结肠癌中高表达Tiaml的细胞也高表达Vimentin，具有更多的转 移表型，同时E．cadherin的表达减少。本课题组前期通过免疫组化检测大肠癌组 织中Tiaml与EMT标志物的表达，显示Tiaml的表达与上皮表型标志物 肠癌的分化和转移有关，其促进大肠癌转移的机制可能与EMT发生有关。并且 发现Tiaml基因表达沉默可逆转Lovo细胞的EMT表型，同时其侵袭转移的能 力减弱。那么对于不同转移能力的大肠癌细胞，Tiaml与EMT标记物的表达情 况怎样?两者又有何关系?将在本研究中探讨。 TGF．Dl是一种具有多种生物学活性的多肽生长因子，可影响肿瘤细胞的形 态，改变其运动及侵袭能力，并能诱导大肠癌细胞发生EMT，此过程由诸多细 胞因子和蛋白一起参与，共同调节。MMP一2的主要作用是降解细胞外基质，与 肿瘤EMT的发生密切相关，影响肿瘤细胞的增值和迁移等行为。由此可见Tiaml、 TGF．B1和MMP．2促进肿瘤侵袭转移都与EMT的发生有关，那么它们之间是否 有关联?需进一步研究证实。 近年有文献报道EMT与非EMT细胞是共同完成自发转移的过程，EMT细 胞通过降解细胞周围基质和血管壁，为非EMT细胞的侵袭转移铺平道路。此观 点与以往认为的发生EMT的肿瘤细胞，其迁移能力比非EMT细胞强有不同之 处。那么在大肠癌中发生EMT的细胞和非EMT细胞之间是否也存在这样的协 同关系呢? 本研究将重点从以上三个方面探讨EMT及其相关因素Tiaml、TGF．Dl和 MMP。2与大肠癌转移的关系，初步探讨EMT及非EMT的细胞在大肠癌侵袭转 移中的作用。 硕士学位论文 目的 1、检测刁i同转移能力的大肠癌细胞系中Tiaml与EMT标记物的表达并分析两 者之间的关系。 2、探讨Tiaml、TGF—Dl和MMP一2在大肠癌EMT中的关系。 3、探讨EMT及非EMT的细胞在大肠癌侵袭转移中的作用。 方法 time．RT 1、用Real PCR法分析TiamlmRNA，E．cadherinmRNA和Vimentin mRNA在6种大肠癌细胞系中的表达情况；通过免疫组化检测Tiaml， LoVo和HT29的细胞骨架。 2、免疫组化检N-应用免疫组化二步法，检测23例大肠正常组织、85例大肠 癌和28例淋巴结转移癌中TGF一[31和MMP一2的表达，结合本课题组前期实 MMP．2在大肠癌EMT中的关系。 3、使用TGF．13l长期诱导大肠癌HT29细胞