遭性有关蛋白的研究.PDF

，传学报，17(4);276--181,,1990 盛cta Censtica5nica 螂鱼雌性有关蛋白的研究 刘澎涛 蒋耀青 （中国科学院遗传所，北京） 本文利用聚丙烯酸胺、SDS,超薄平板等电聚焦等多种电泳方法，对不同性别娜鱼的血清分 析后，发现了两种与雌性有关的特异血清蛋白，FSSP-1及FSSP-11。分离提纯了含量较多的 FSSP-11，其分子量、等电点、氨基酸组成分析的结果证明，它是一类与已报道过的鱼类雌性 蛋白极不相同的、与性别有关的蛋白。为性别问题的研究提供了有意义的资料。 关键词：螂鱼雌性蛋白，聚丙烯ft胺凝胶电·泳，高效液相色谱分析，氨基酸组成分析 性别问题一直是生物学研究中的一个重要课题，因为它既有重要的理论意义，又与生． 产实践有着密切的联系。 性别的研究包括两个重要的内容：性别决定和性别分化。性别决定一般在受情的瞬 间就已完成，但高等动物早期胚胎的性别并来分化，只是到一定阶段时，由于特定基因n- 激活或开启，才使胚胎向某一特定性别发育井保持下去。．在此过程中必然会有与性别有 ‘ 关的基因产物— 蛋白质．的出现。因此探寻、检测与性别有关的蛋白，对于阐明和研究性 别问题有着重要的意义。 迄今，已在许多物种中发现了性别特异蛋白，如日本血吸虫 Schistosomamansoni的 雌性蛋白15‘3，它的cDNA也已克隆并表达[41。两栖类、爬行类、鸟类某些物种产卵期的血 清中也曾检测到雌性蛋白3,〔1930Coe[61则在小鼠血清中发现了雌性蛋白的存在，它属于C 反应蛋白 C（RP）家族中的一员，为性连锁遗传[7,830 虽然鱼类在生物进化过程中处于较低等的地位，但鱼类性别决定的方式多种多样，大 多数虽是雌雄异体，但缺少明显异型性染色体的存在；因此研究鱼类的性别有关蛋白，可 以为阐明性别问题提供重要的资料。 有的学者在不同的鱼种中找到过性别特异蛋白，如 Yu2[1，在卵生的圆口纲中，Fuka_ yamas+0l在七鳃鳗中均发现存在有雌性特异蛋白，而奥利亚罗非鱼 T（ila对。。“，。。）血 清中的雄性蛋白则是雄性个体的遗传标志[5]。还有不少学者以娃科鱼为材料，较详细地 研究了雌性特异血清蛋白的特性和功能11〔-13,191O 从已有的资料来看，很少有以鲤科鱼进行同类研究的。我们认为，如能以中国重要的 养殖鱼类螂鱼为材料，寻找出性别有关蛋白，对其结构、功能进行深人研究，并在对基因产 物蛋白质研究的基础上，若能分离出与性别这一性状有关的基因，应用重组 DNA技术， 将育可能阐明鱼类的性别问题和控制性别，这将为生产提供重要的科学依据。 本文于1989年3月27日收到。 斗期 刘澎涛等：a鱼雌性有关蛋白的研究 27, 材 料 与 方 法 一（）试验材料 雌雄螂鱼 C（arassiusauratus）均购自北京海淀万泉庄渔场。个体重100-2508。尾 静脉采血，室温下静置1小时后，再分离血清。鱼的性别解剖确证。 二（）不同性别娜鱼血清的电泳分析 1.聚丙烯酞胺凝胶电泳 按张龙翔Is]法稍加修改。，胶浓度为7务，加样量为血清 3[slo糖蛋白和脂蛋白的染色按莽克强等法ti［]0 聚丙烯酞胺梯度凝胶电泳D]的梯度为5--10多。，电泳后，按标准蛋白及其相对迁移率 绘制标准曲线，并从其上查出差异蛋白的分子量。 2.SDS聚丙烯酚胺凝胶电泳 参照Smith的方法。胶浓度7.5%，上样量为 3pit。考马斯亮蓝染色，退色后，从分子最标准曲线上查得差异蛋白分子量。 3.超薄乎板聚丙烯酞胺等电聚焦电泳、 制胶方法，电泳条件及染色等均按LKB公 司推荐的方法。 三（）性别有关蛋白的纯化 血清经聚丙烯AP胺凝胶电泳后，沿电泳方向先切下1个条带，快速染色后，寻找特异 带的位置。在未染色的凝胶上，切下相应部位。用ISCO公司1750型电泳浓缩器进行蛋 白质的电洗脱浓缩：切下的胶条放在溶液A中(0（.05mo1/LTris·ClpH7.5,0.15mol/L NaCl,0.1外NaN3)，于4℃平衡。电泳浓缩器内槽加溶液