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各种培养基配置与注意事1
各种培养基的配置及注意事项
6-BA配置:
配置时要加入少量稀酸或97%酒精,再加入蒸馏水,可适当加热。
IBA配置:
配置时要加入少量稀碱,再加入蒸馏水。
注意:
配这两种溶液时,若直接加蒸馏水,则不溶。(注:溶解生长素时,可用少量0.5~1N的NaOH或95%酒精溶解;溶解分裂素类用0.5~1N的HCl加热溶解,如再加蒸馏水,易产生白色沉淀,此时再加热水。)
母液配置:
母液
配置量
药品名称
称取量
倍数
母液1①
250ml
NH4NO3
KH2PO4
41.5g
4.25g
100×
母液1②
250ml
KNO3
CaCl2.2H2O
47.5g
11g
100×
母液1③
250ml
MgSO4.7H2O
9.25g
100×
母液2
500ml
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
CaCl2.6H2O
CuSO4.5H2O
Na2MoO4
KI
H3BO3
535mg
215mg
0.625mg
0.625mg
6.25mg
20.75mg
155mg
500×
母液3
250ml
Na2.EDTA
FeSO4.7H2O
932.5mg
695mg
100×
母液4
500ml
烟酸
VB6
VB1
肌醇
甘氨酸
12.5mg
12.5mg
2.5mg
2.5g
50mg
1000×
MS固体培养基:
以配1LMS固体培养基为准:
MS固体干粉 41.5g
蒸馏水 1L
2g/l的6-BA 2.5ml
2g/l的IBA 0.25ml
注意:待溶液配好后,用pH计将溶液的pH值调到5.8~ 6.0,煮沸至均匀无沉淀后,分装20小瓶(即50mL/瓶),灭菌之前盖子不要拧太紧,出锅后再拧紧盖子。
MS液体培养基:
以配1LMS液体培养基为准:
母液1① 5ml
母液1② 10ml
母液1③ 5ml
母液2 1ml
母液3 5ml
母液4 1ml
2g/l的6-BA 0.5ml
2g/l的IBA 0.1ml
蔗糖 30g
注意:待溶液在烧杯中混匀之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。
LB液体培养基:
以配1LLB液体培养基为准:
蛋白胨(TRYPTONE) 10g
酵母提取液(YEASTExTrACT) 5g
NaCl 10g
注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。待灭菌结束后,温度降至55℃左右(不烫手)时,加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。
LB固体培养基:
以配1LLB固体培养基为准:
蛋白胨(TRYPTONE) 10g
酵母提取液(YEASTExTrACT) 5g
NaCl 10g
琼脂粉 15g
注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。待灭菌结束后,温度降至55℃左右(不烫手)时,加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。 在进行到平板。
组织培养体系的建立
外植体获得
具体操作:
将外植体(用镊子)夹到其中一个空培养罐中
倒入75%的酒精消毒30S,重复三次。
倒入升汞消毒4min,一次。
倒入蒸馏水清洗,重复三次。
盖上盖子,备用。
点燃酒精灯,在另一只空的培养罐中倒入些75%的酒精(用于铁制仪器消毒)。
将铁架子在酒精灯上进行消毒,镊子和手术刀浸入培养罐中,然后放在酒精灯上灼烧,起杀菌作用。
用镊子夹住一培养皿在酒精灯上稍微烫下,灭菌。
在培养皿中倒入少量的蒸馏水。
用经冷却的镊子将外植体夹到带少量蒸馏水的培养皿中,用刀切取其腋芽,将腋芽外的壳小心剥去,再在腋芽的尖端切一刀,使其暴露生长点。
打开培养基瓶子之前在酒精灯上稍微烫下,打开瓶盖后,瓶口在酒精灯上灼烧下,以防污染。
用镊子将腋芽植入培养基中,瓶口灼烧下,旋紧盖子。
注意:镊子和手术刀要经常灼烧,必要时可将镊子和
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