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实验11 植物芳香物质的提取分离及测定 芳香物质是具挥发性的、能够产生一定气味的含香物质的总称，它是构成和影响果品 鲜食、加工质量的主要因素。到目前为止，已从杏果实中鉴定出100 多种芳香物质。芳香物 质分析一般要经过芳香物质的提取、纯化、浓缩、气相色谱分离并配合质谱定性定量。为了 得到较全面的分析，往往需要同时使用几种提取方法。 加热果汁，使之在100℃以下沸腾，产生二次蒸汽，夹带芳香物质从果汁中分离出来， 然后用有机溶剂从中回收挥发性物质，挥发性物质在溶剂相和蒸馏液之间的分配系数不同， 通过溶剂的选择，排除那些不重要或干扰分析的化合物，有选择性的提取芳香物质。同时蒸 馏萃取法是蒸馏提取和溶剂提取的合并，同时加热果汁和溶剂，两种蒸汽混在一起后完成萃 取工作。它吸收了二者的优点，并且只需少量的溶剂就可有效地提取大量样品中的挥发性成 分。经提取、纯化、浓缩的精油，采用气相色谱-质谱-计算机联用技术进行分离鉴定。通过 检索谱图库，并结合标准质谱图，确认化学成分；运用峰面积归一化法或内标法，求得了各 化学成分的含量。 本实验以杏果实为试材，学习芳香物质的提取分离及测定方法。 一、试材及用具 1．试材 杏果实 2 ．仪器 气相色谱-质谱-计算机联用仪（Agilent 6890N-5973N 型）、KD 浓缩器、同时 蒸馏萃取装置（SDE）、电热恒温水浴锅、套式恒温加热装置等。 3 ．试剂 二氯甲烷、无水硫酸钠（AR ）、3-壬酮等。 二、方法步骤 1．果实芳香物质的提取 采用同时蒸馏萃取法，装置见下图。A 瓶中装有样品和蒸馏水，B 瓶中装有二氯甲烷 或其他有机溶剂，两部分加热后，各自的蒸汽在装置的顶部混合，并通过冷凝管冷却，在 EF 段分层，有机层从D 端返回B 瓶，水层从C 端返回A 瓶，这样便完成了整个萃取过程。 如此连续进行，使样品中的挥发性有机物萃取浓缩。 称取杏果肉500g，打浆后置于3L 圆底烧瓶中，加入内标物3-壬酮（最终浓度为0.7ppm ）， 加入1L 蒸馏水；于250mL 圆底烧瓶中加二氯甲烷60mL 。将SDE 装置安装好，样品液用套 式恒温器加热，保持微沸状态，二氯甲烷于55℃水浴中加热，连续蒸馏萃取3h 。二氯甲烷 萃取液中加无水硫酸钠5g，脱水干燥一昼夜，过滤。滤液于50℃浓缩，回收二氯甲烷，浓 缩至0.2～0.4mL，得到芳香物质浓缩液。待气相色谱-质谱测定。 2 ．气相色谱-质谱测定 （1）气相色谱条件 色谱柱：HP-5 弹性石英毛细管柱25m ×0.25mm ×0.1 μm; 柱温40 ℃（2 ℃/min ）-250℃保持40 min ；汽化室温度270 ℃；进样量0.2 μL ；载气He 流量1mL/min; 分流比100:1。 （2 ）质谱条件 GC-MS 接口温度280 ℃，EI 离子源；离子源温度230 ℃；电子能量70ev ； 质量范围29～600amu 。 图4 －5 同时蒸馏萃取装置 3 ．芳香物质的定性与定量 （1）定性分析 芳香物质组分分离大多数采用气相色谱法，不同组分形成其各自的色谱峰，按照色谱峰 的保留值来定性。芳香物质成分的鉴定可用红外光谱、紫外光谱、毛细管色-质谱联用、核 磁共振等方法。目前最广泛的采用色-质谱联用法。 取芳香物质提取物 0.2 μL ，用气相色谱-质谱-计算机联用仪进行分析鉴定。通过 G1701CA 化学工作站数据处理系统，检索Nist98/Wiley 图谱，再结合有关文献进行人工谱 图解析，确认芳香物质的各个化学成分。 （2 ）定量分析 a ．归一化法 归一化法应用时，必须将样品的全部组分馏出，并都能产生相应信号。 计算公式为： P % = m /(m) ×100% = A f ′/ (A f ′+A f ′+ …+A f ′) ×100% i i i i 1 1 2 2 n n 式中：Pi—i组分的百分含量 mi—被测组分i 的量； m—被测物试样的总重量； Ai—i组分峰面积； f ′i—相对校正因子 相对校正因子f ′，即为物质i