转录因子Pax4蛋白质转导功能的研究.pdf

中华细胞与干细胞移植 (电子版)2009~6月 第l期 ChinCellStemCel1TransNant(ElectronicEdition)．Jun2009．No．1 · 实 验 研 究 · 转录因子Pax4蛋 白质转导功能的研究 路君 张舒羽 卢大儒 【摘要】 目的 探讨胰腺相关转录因子Pax4是否具有蛋白质转导功能及其进入细胞后的生物学 功能。方法 Ni柱亲和层析纯化原核表达的含His标签的Pax4全长蛋 白质及一系yJIPax4突变体与EGFP 的融合蛋白。融合蛋白孵育的细胞，分别用于进胞检测和Pax4转导后的功能检测。结果 外源纯化 的Pax4蛋 白能够转导进入HELF细胞。Paired．EGFP融合蛋 白可以进入包括大 鼠胰岛细胞在 内的多种 细胞。转导进入细胞的Pax4蛋 白能够减少TNF0引【发的胰岛细胞凋亡，增加胰岛细胞体外培养的存活 率。结论 研究结果表明转录因子Pax4具有蛋 白质转导功能，完整的Paired结构域是Pax4的蛋 白质转导 结构域 (PTD)，外源纯化的Pax4蛋白在转导入胰岛细胞有抑制细胞凋亡的作用。 【关键词】Pax4；Paired结构域；蛋白质转导结构域；胰岛细胞 Pax4proteincanbetransducedintomammaliancellsLUJun，ZHANG Shu-yu，LUDa—r“．StateKeyLaboratory ofGeneticEngineering，SchoolofL Science，FudanUniversit3；Shanghai200433，China 【Abstract】ObjectiveToexaminewhetherthepurifiedPax4proteincanbetransducedintocells，andto explorewhethertransducedPax4proteinmaintainsitsfunctionaleffectastheendogenousPax4．M ethods We constructedHis—taggedintactPax4andseveralEGFP—taggedmutantPax4proteinsEachfusionproteinwaspurified usinganinitrilotriaceticacidcolumnfrom abacterialexpressionsystem．Theinternalizationoftheproteinwas investigatedbyimmunostainingandWestern blotanalysis．M TT andTUNEL assaywereperformedtocharacterize theeffectofPax4treatmentonprotectingisletcellagainstapoptosisinculture．ResultsPax4proteinwasdetected inHELFcellsbyWestern blotanalysisusinganti-6·--histidineantibody．Paired-E·GFPbutnottheotherfusionproteins canpermeateintovariouscelltypesincludingpancreaticislets．TransducedPax4proteincanprotectTNFct—induced apoptosisandprolongedisletcellsurvivalinculutre．Conclusion ThesedatasuggestthatPax4proteincanpemr eate intoHELFcells，thePairedDomainofPax4servesasanove1proteintransductiondomain(PTD)，andPax4protein ~ansductioncouldbeasafeandvaluablestrategyforprotectingisletcellinculutrefrom apoptosis． 【Keywords】Pax4；PairedDomain；Proteintransductiondomain；lsletcell Pax家族转录因子是组织发育和细胞分化中重要的 少，最终引发糖尿病。胰高血糖素样肽(GLP