不同的G 四链体结构对DNAzyme 活性的影响 - 中国生物化学与分子.PDF

ＩＳＳＮ　 １００７⁃７６２６ 中国生物化学与分子生物学报　 ｈｔｔｐ：／ ／ ｃｊｂｍｂ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ２０１６年７月 ＣＮ　 １１⁃３８７０／ Ｑ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３２（７）：８２３～８２９ ＤＯＩ：１０１３８６５／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｂｍｂ 不同的Ｇ 四链体结构对ＤＮＡｚｙｍｅ活性的影响 １） ２）∗ 卢　 宇 ，　 关一夫 １） （中国医科大学 转化医学研究院，教育部医学细胞生物学重点实验室， ２ ）生物化学与分子生物学教研室，沈阳　 １１０１２２） 摘要　 富含鸟嘌呤的ＤＮＡ序列在金属离子（通常是钠、钾离子）存在的条件下，可以形成稳定的Ｇ⁃ 四链体（Ｇ⁃ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ）。 该Ｇ⁃四链体能够结合ｈｅｍｉｎ（氯高铁血红素）形成具有过氧化物酶的活性 的Ｇ四链体⁃ｈｅｍｉｎ复合物ＤＮＡｚｙｍｅ。 将这一原理联合滚环扩增技术可以对核酸进行可视化的检 测。 本研究旨在探索Ｇ⁃四链体⁃ｈｅｍｉｎ复合物中，Ｇ⁃四链体结构以及两个Ｇ⁃四链体之间的链接长度 与ＤＮＡｚｙｍｅ过氧化物酶活性之间的关系。 实验分别选取了平行、反平行和混合结构的Ｇ⁃四链体， 通过热差异光谱、紫外光谱、圆二色光谱对结构进行分析，不断加长链接序列并测定３种结构形成 的ＤＮＡｚｙｍｅ活性，发现正平行结构的Ｇ⁃四链体具有更高的ＤＮＡｚｙｍｅ活性和更明显的可视化效果。 综上所述，平行Ｇ⁃四链体结构可以用来满足裸眼可视化检测的需求，为无需复杂仪器的核酸检测 奠定了方法基础。 关键词　 Ｇ⁃四链体；ＤＮＡｚｙｍｅ；可视化检测 中图分类号　 Ｑ５２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｇ⁃ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ＤＮＡｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ １） ２）∗ ＬＵ Ｙｕ ，ＧＵＡＮ Ｙｉ⁃Ｆｕ １） （ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ； ２）Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０１２２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ　 Ｇｕａｎｉｎｅ⁃ｒｉｃｈ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｒｅ ｋｎｏｗｎ ｔｏ ｆｏｌｄ ｉｎｔｏ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｋｎｏｗｎ ａｓ Ｇ⁃ ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｔａｌ ｉｏｎｓ， ｕｓｕａｌｌｙ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ． Ｇ⁃ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ ｉｓ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ｈｅｍｉｎ ｔｏ ｆｏｒｍ ａ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ Ｇ⁃ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ⁃ｈｅｍｉｎ ＤＮＡｚｙｍｅ ｗｉｔｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｖｉｓｕａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｃａｎ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＤＮＡｚｙｍｅ⁃ｂａｓｅｄ Ｒｏｌｌｉｎｇ⁃ｃｉｒｃｌｅ