血清凝集实验原理、方法.pptVIP

　实 验 五　肠杆菌科检验（二） 目的要求 掌握： 血清凝集实验原理、方法。 肥达试验的原理、结果分析及临床意义。 熟悉： 肥达反应的操作过程。 原理：玻片凝集实验为定性试验，用已知抗体检测未知抗原。 血清凝集实验 实验内容 实验内容 实验内容 实验内容 实验内容 血清的凝集效价： 以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为标准。 实验内容 1 2 3 4 5 O 1:160 1:320 1:160 1:40 1:40 H 1:320 1:80 1:80 1:80 1:320 PAH 1:40 - 1:320 1:80 1:320 PBH - 1:80 1:80 1:40 1:320 伤寒 伤寒早期 副甲 阴性 回忆反应/疫苗接种 微免教研室 西安医学院 病原生物学与免疫学教研室 用已知伤寒伤寒沙门菌菌体O抗原和鞭毛H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌鞭毛H抗原的诊断菌液与受检者血清作试管或微孔板定量凝集试验，检测受检者血清中有无相应抗体及其效价的试验。从而协助诊断伤寒或副伤寒。 原 理 1．待检血清、生理盐水、伤寒杆菌H、O及甲型副伤寒沙 门菌、肖氏沙门菌H诊断菌液。 2．微孔板、1ml刻度吸管、温箱、冰箱等。 材 料 方 法 1:1280 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 最终稀释度 ⑦（对照） ⑥ ⑤ ④ ③ ② ① B ⑦（对照） ⑥ ⑤ ④ ③ ② ① A ⑦（对照） ⑥ ⑤ ④ ③ ② ① O ⑦（对照） ⑥ ⑤ ④ ③ ② ① H 各管加入 菌液 0.25ml 盐水0.25ml 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 1:20 血清稀释度 振摇混匀后，置于56℃温箱孵育30分钟，再置于4℃冰箱10分钟后观察结果。 结 果 H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示 ＋＋＋＋ 上清完全透明，细菌全部形成凝集块 ＋＋＋ 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 ＋＋ 50％细菌形成凝集，液体半澄清 ＋ 仅少数细菌凝集，液体比较混浊 － 液体均匀混浊，无凝集 结 果 临床上均以两次标本（病程早期及恢复期）的血清效价有明显升高者为新近感染该病的指征。其中恢复期血清效价≥早期4倍有临床诊断意义。一般单份血清效价H≥1:160， O≥1:80,A≥1:80,B≥1:80以上，才有诊断伤寒或副伤寒的参考价值。 举 例 实 验 报 告 1 记录血清凝集实验原理、结果并分析。 2 记录肥达实验的结果并分析其临床意义。 微免教研室