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生物04-3刘存熙、黄泽平生物04-2胡诗诗、刘成林 * * PEG/ (NH4) 2SO4 双水相体系萃取 甘草中的有效成分 　 甘草的主要有效成份甘草酸具有消炎解毒、抗氧自由基、调节机体免疫力等作用,目前已被广泛应用于食品、饮料、化妆品、医药、卷烟等行业[1 ,2 ] 。工业上广泛应用的是水提法,该法操作容易、设备简单、溶剂价廉,但提取效率不高,易造成资源浪费。 双水相萃取技术(Two2aqueous phase ex2traction ,简称ATPS) ,是近年出现的新型生物化工分离技术。由于双水相萃取分离过程条件温和、可调节因素多、易于放大和操作,不存在有机溶剂残留问题,特别适用于生物物质及天然资源中有效成分的分离和提纯[3 ,4 ] 。 这里讨论了以聚乙二醇(poly ethylene glycol ,简称PEG) 和(NH4 ) 2SO4 构成的双水相体系用于甘草浸提液中有效成分甘草酸的提取分离 试剂与仪器 硫酸、氨水、硫酸铵、磷酸氢二钾均为分析纯、聚乙二醇(化学纯) 、甘草、甘草酸单铵盐(纯度≥98 %)、916 型紫外2可见分光光度计、FZ102 植物粉碎机、DGSY电热恒温水浴锅。 　甘草酸浓缩液的制备 甘草酸的结构如图1 所示,甘草酸微溶于冷水,溶于热水和热的稀乙醇,不溶于无水乙醇和乙醚[5 ] 。甘草酸与氨反应可生成水溶性较大的甘草酸铵盐,采用稀氨水热回流法提取可增加提取率。 将粉碎的甘草加入少量氨水浸泡水煮一定时间,在100 ℃回流热浸60min 后,过滤,滤渣用少量热水洗涤,滤液加 热真空浓缩至原来的1/ 3 ,即得到甘草酸浓缩液,冷却,低温保存备用。 图1 　甘草酸的结构式 　结果与讨论 　双水相萃取体系的选择 根据甘草酸分子结构疏水性较强及分离体系特点,选用聚合物/ 盐双水相体系对甘草酸进行分离。在室温条件下测定了一定浓度范围PEG/(NH4) 2SO4 和PEG/ K2HPO4 两个双水相体系的相图,见图3 和图4。 图3 　PEG/ K2HPO4 　双水相体系相图 图4 　PEG/ (NH4) 2SO4双水相体系相图 比较PEG/ (NH4) 2SO4 、PEG/ K2HPO4 两个双水相体系的相图可知,成相物质都需要达到一定的浓度才能分相,PEG分子量越大,成相所需的成相物质浓度越小。当盐浓度一样时,PEG/ (NH4) 2SO4双水 相体系中成相所需的PEG浓度较低。对于相同分子量的PEG,PEG/ (NH4) 2SO4 双水相体系中成相所需盐的浓度也较低。主要是(NH4) 2SO4 的水化能大于K2HPO4 的水化能,所以其分相能力强; 并分相速度较快,自然分相时间一般为5～20min。另一方面可减少分离原材料的用量,降低操作成本。 双水相萃取条件的确定 以PEG/ (NH4) 2SO4 双水相体系为分离体系,以甘草,酸回收率为考察指标,考 察了滤液∶萃取剂( PEG 溶液) 体积比、PEG/ (NH4 ) 2SO4 质量比和PEG分子量等因素,进行3 因素3 水平L9 (34) 正交试验。 由此可知,各因素的极差R 大小顺序为RB RA RC ,即双水相成相质量比B 对甘草酸单铵盐萃取率的影响最大,其次是萃取剂比值A ,最小是PEG分子量C。双水相体系中PEG/ (NH4) 2SO4质量比增大, PEG 浓度增 加,体系中的疏水性增强,PEG相与甘草酸单铵盐间的作用增加,使甘草酸单铵盐分配更多到富含PEG 的上相。另一方面,根据聚合物/ 盐双水相相图可知, PEG浓度增加,相比增大,回收率增加。但PEG/ (NH4) 2SO4 质量比太大时,PEG相成相物质分子间的作用大大增加,粘度增大,相界面张力亦将增大,溶质在相间的传递和在相中的扩散阻力大大增加,反而不利于不 * *