KISS1基因免疫去势效果及机制的研究.docVIP

　　KISS1基因免疫去势效果及机制的研究 1 文献综述 1.1去势的目的和现状 去势是指通过抑制或消除性活动，促进动物生长和管理，改善畜产品质量(杨利国 2002)。通过去势可以达到便于饲养管理，提高畜产品的质量，避免宠物生育，控制野生动物数量等目的。去势在动物上的应用十分广泛。（1）避免动物因发情、交配和受孕而延长生长周期，缩短出栏上市的时间；（2）避免动物自交乱配，利于选育优良品种；（3）使性情暴躁的动物失去好斗性，变得安静，易于饲养管理(Kiyma et al 2000; Rydhmer etal 2010)；（4）降低公猪和公羊中的臊味（主要是粪臭素和雄烯酮）或膻味（主要是4-甲基辛酸和 4-甲基壬酸），提高肉的品质(Lunde et al 2010; Bonneau et al 2000; Paulyet al 2008; Brunius et al 2011; Salvatore et al 2007; 唐璐等 2014; Sutherland and Ames1995)；（5）避免宠物（如狗和猫）因生育带来的麻烦(Boann et al 2013)。家畜去势术在我国具有久远的历史，最早记载于夏代《夏小正》中，把对公畜去势称为攻驹或攻特。常用的传统去势方法有手术、物理和药物去势法。手术去势易导致动物伤口感染和疼痛应激，进而导致发病率和死亡率升高；药物去势多采用强刺激性药物进行去势，它能引起动物强烈的疼痛感和炎症反应，甚至引起阴囊溃烂，而且须直接注射于动物性腺，难度比较大，技术要求比较高(白冰 1999)；物理去势在夏季容易引起被结扎的部位发炎，甚至引起全身炎症反应而导致动物死亡。此外，以上三种去势方法因使动物的性腺完全丧失机能而影响了其对生长的促进作用(杨利国 2002)。 . 1.2免疫去势研究进展 一门全新的交叉学科激素免疫学，在上世纪 60 年代末，随着内分泌学、生物化学和免疫学等学科的充分发展而诞生 (杨利国 2002)。其中涉及的激素免疫中和技术(Hormone immunoneutralization, HIN) 为免疫去势的研究提供了有力支持。免疫去势就是利用激素去免疫动物，产生针对该激素的抗体，以中和内源性的激素，使该激素的生物活性部分或全部丧失，从而改变动物的内分泌平衡，达到去势的目的。激素免疫去势的特点是：（1）避免了手术去势产生的疼痛感和术后感染，提高了动物福利和存活率(Gamero-Negroacute;n et al 2015; Leclercq et al 2014)；（2）相比于手术去势，此方法操作简便，成本低廉，易于大面积推广；（3）保留了部分性腺对动物生长的刺激作用(王彩平等 1994)。免疫去势原理在于：选择下丘脑一垂体一性腺轴（Hypothalamic-pituitary-gonadalaxis，HPG 轴）中的生殖激素成员，制成疫苗免疫动物，诱导机体产生针对目标激素的抗体进而中和内源性的目标激素，最终导致性激素水平下降，性器官萎缩，达到去势的目的 (Brunius et al 2011; Falvo et al 1986; Ferro 2002; iguel et al2014)，去势的效果优于 FSH 和 LH 靶标(Falvo et al 1986; Moudgal et al 1997)。然而，GnRH 的分泌受 KISS1 的控制。KISS1 由下丘脑分泌，处于生殖轴控制的最顶端。体外研究表明，KISS1 基因编码的蛋白 kisspeptin 在下丘脑细胞系、垂体细胞、性腺细胞中都能与受体 GPR54 结合，促进 GnRH 和其它激素的分泌(Smith et al 2005; Suzukiet al 2008)。体内研究表明，KISS1 敲除后引起了动物睾丸萎缩，90％的绵羊于非繁殖季节内静脉注射 kisspeptin 后能够排卵(Lapatto et al 2007; Uenoyama et al 2015;Clarke et al 2007)。体外、体内两方面研究均证明了 KISS1 编码的蛋白 Kisspeptin 对青春期起始和 GnRH 的分泌起着决定性的作用, 通过控制 GnRH 的分泌起到繁殖控制开关的决定性作用。由此推测，KISS1 可能是制备免疫去势疫苗的一个新靶标。随着基因免疫技术的发展，其安全性问题也逐渐显现，其中，抗性筛选标志基因成为临床应用的一个限制因素。目前所报道的 GnRH 免疫去势基因疫苗中普遍存在着抗性基因（kan 或 amp）(叶文剑 2012; Khan et al 2008 and 2007)，可能会造成基因疫苗制作中潜在的痕量过敏现象和临床应用上抗药菌株的传播，威胁到家畜和人体的健康(Han et al 2014)。因此，用