携带PTEN基因重组腺病毒对群司珠单抗耐药乳腺癌细胞的逆转作用.pdfVIP

中国肿瘤生物治疗杂志 http：／／www．biother．org ChinJCancerBiother，Oct．2008，Vo1．15，No．5 ·433· DOI：10．3872／j．issn．1007-385X·2008·05·007 ·基础研 究 · 携带j，髓『N基因重组腺病毒对群司珠单抗耐药乳腺癌细胞的逆转作用 肖 呜，王雅杰 (第二军医大学 附属长海医院肿瘤科 ，上海 200433) [摘 要] 目的：研究重组腺病毒介导的野生型 PTEN基因转染对群司珠单抗 (traxtuzumab)耐药性乳腺癌细胞的逆转作 用。方法 ：构建携带野生型PTEN基因的重组腺病毒AdPTEN，感染群司珠单抗耐药性乳腺癌细胞株 BT474，MTT比色法和 FCM检测AdPTEN感染对群司珠单抗作用下 BT474细胞增殖和凋亡的影响；DNA片段化实验分析BT474凋亡与感染时间的 关系；Westernblotting法检测AdPTEN感染对 BT474细胞中丝氨酸／苏氨酸激酶(Akt)磷酸化水平的影响。建立荷乳腺癌裸 鼠模型，观察AdPTEN联合群司珠单抗治疗对乳腺癌移植瘤生长的影响，检测移植瘤细胞中FTEN蛋白的表达 、细胞凋亡、超 做结构的改变。结果 ：成功构建重组腺病毒AdPTEN，其滴度为4．2x10“TCID50／ml。PCR、RT—PCR和Westernblotting法证 实P Ⅳ基因可被转导入 BT474细胞内并稳定高效表达。AdPTEN联合群司珠单抗处理对BT474细胞增殖的抑制非常显著 地强于单用群司珠单抗治疗 (P0．01)；细胞出现明显凋亡，凋亡率为(20．7±5．83)％，并且出现G。期阻滞和s期明显减少， 与AdLacZ组和对照组相比差异均有统计学意义(P0．01)；感染组细胞 DNA出现典型的梯形条带，以感染后24—36h最为 明显；AdPTEN感染明显下调 BT474细胞 内Akt的磷酸化水平。AdPTEN和群司珠单抗联合治疗可强烈抑制裸鼠移植瘤生 长，疗效明显强于群司珠单抗治疗组 (P0．O1)；AdPTEN治疗后，移植瘤细胞 中PTEN表达明显，TUNEL和电镜检测均证实 乳腺癌移植瘤细胞的凋亡。结论 ：AdPTEN治疗可抑制BT474细胞Akt的磷酸化，阻断PI3K／Akt信号通路的持续活化 ，恢复 耐药细胞对群司珠单抗的敏感性 ，引起细胞凋亡。 [关键词] 乳腺癌；群司珠单抗；耐药 ；P陋Ⅳ；基因治疗 ；耐药逆转 [中图分类号] R737．9；R730．54 [文献标志码] A [文章编号] 1007·385X(2008)05—0433—07 Reversalofdrugresistanceoftrastuzumab-resistanthuman breastcancercells byrecombinantadenoviruscarryingPTEN gene XIAOMing，WANGYa-jie (DepartmentofOncology，ChanghaiHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai 200433，China) [Abstract] Objective：Tostudytheroleofadenoviralm·ediatedP阿Ⅳgenetransfectioninreversingdrugresistanceof trastuzumab—resistanthumanbreastcancer．Methods：RecombinantadenovirusescarryingP他_1、『gene(AdPTEN)were constructedandtransfectedintotrastuzumab．resistanthumanbreastcancercelllineBT474．Proliferationandapoptosisof BT474cellstreatedwithAdPTEN andtrastuzumabweremeasuredbyMTT assayandFCM．TimecourseofBT474 cells apoptosisinducedbyAdPTENwasanalyzedbydetectionofDNAfragmentation．Westernblottingwasemployedtomeasure phosphory