可用作生物杀虫剂的家蚕核式多角体病毒省01f65.orf91的基因功能分析.docVIP

　　可用作生物杀虫剂的家蚕核式多角体病毒省01f65.orf91的基因功能分析 1文献综述 1.1家香、杆状病毒与食品 随着人们健康意识的加强，食品营养与食品安全越来越引起人们的重视。食品营养的评价标准不仅指食品应该满足人体所需的热量，还包括各种营养素的比例。食品安全指食品无毒害，对人体无急性、亚急性及慢性危害，主要包括食品中不含有毒或引起疾病的污染物质。为此，专门制定了相关的食品安全标准。其中，非常重要的一条即是食品中农药、致病微生物、污染物及其它有毒物质的限量规定。 1.1.1家香与食品的关系 家蚕除了能制造丝網外，家香幼虫组织及香_中含有各类氨基酸，其中包含很多必需氨基酸，为营养全面的高质量蛋白。随着现代科学技术的发展，及人们对食品营养与安全的重视，桑香的食用及药用价值也越來越引起人们的兴趣。家香蛋白质的含量较其它家禽，家畜的更高。在我国多地和世界其它地方人们都有食用家蚕及蚕蛹的习俗。蚕蛹含有多种微量元素，氨基酸含量较鸡蛋和牛奶更高，其营养及医疗价值非常大，对糖尿病、肝炎、营养缺乏的人而言是非常理想的食品。目前，蚕踊已经被制备成罐头推入市场。而香丝中的丝素含有18种氨基酸，也逐渐开始作为保健食品得到开发。研究者进一步将蚕丝裂解成低聚肽及氨基酸从而有利于人们更好地吸收。香卵除了含有丰富的氨基酸及糖类外，还含有多种生理活性物质。己有报道利用蚕卵治疗妇科病。此外，用家蚕入药还可治疗糖尿病。而蚕沙、白僵踊、蚕苗、蚕踊自古以来都是中药药材。由于家蚕对于农药及污染物的高敏感度，因此以家蚕、香蛹、蚕卵及蚕丝等附属品作为食物及药物，营养丰富并且安全、可靠，无需担心农药或其它重金属等的残留问题。然而，家蚕核型多角体病毒为家蚕的主要病原体，家蚕感染该病毒后全身肿胀死亡，严重影响了家蚕食品的品质和数量。每年因杆状病毒造成桑蚕业的损失巨大。 1.2杀虫剂与食品安全 随着全世界人口的逐渐增多，人们对粮食、经济作物等的需求量也日益增大。部分昆虫以农作物为食，对农林业造成巨大损失。据统计，每年全世界因病虫害造成的经济损失高达几千亿美元。为了提高产量，减少损失，从古至今，人们都在寻找各种方法保护农作物，防治病虫害，从而提高产量。初始，一些天然的无机物，如硫磺、砷、硼酸、亚硝酸盐、冰晶石等被用于杀虫，成为最原始的杀虫剂。上世纪开始，效果较差的无机杀虫剂逐渐被有机杀虫剂所取代。在成功地发现了DTT能有效控制拒疾及虫媒病后，科学家又陆续开发了有机氯，有机憐等有机杀虫剂。然而有机杀虫剂有生物浓缩性且在环境中存留时间长，负面影响大。化学农药虽然能有效控制病虫害，却容易使害虫产生耐药性，而且农药常常残留在作物表面，被食入后通过食物链影响更多的动物及人类。同时，化学农药会通过降雨渗入到地下水中污染水源，或挥发在大气中污染空气，最终危及人类的健康。据统计，全世界因农药中毒者每年约有300万，而仅在中国就高达10万。随着人们食品安全及环境保护意识的加强，人们不再一味地追求农药的高效性，而把目标放在了安全性方面。传统农药对环境的污染及对健康的侵害逐渐被人们所重视，低毒、高效的新型农药越来越受到人们的青睐。现今，生物技术的高速发展，特别是细胞工程与生物工程技术相结合，生物农药替代化学农药，应用越来越广泛，并有逐渐取代化学农药的趋势。相比传统农药而言，生物农药更加安全、高效、不容易产生抗药性及对环境更友好。目前，生物杀虫剂主要包括植物性杀虫剂和微生物杀虫剂。植物杀虫剂包括印楝、鱼藤酮、烟碱、除虫菊等。而微生物杀虫剂通过利用病原微生物及产物杀灭害虫，是生物杀虫剂中非常重要的部分。病毒、细菌、真菌、放线菌等都可利用，成为微生物杀虫剂。其中，病毒能感染昆虫，并引发昆虫流行病，从而有效保护农作物。 2基因生物信息学分析 Bm65在家蚕核型多角体病毒基因中编号为65，是麟翅目杆状病毒的保守基因，NCBI数据库中登录号为（GeneBankYP002884307.1),该数据库的序列于BmNPV T3株。本章中利用生物学软件对Bm65进行一系列生物信息学分析，通过对其转录表达及蛋白大小、保守性等进行了预测，有利于进一步研究该基因的功能。 2.1分析软件及方法 Bm65位于BmNPV基因组的59,670-59,984 nt之间，编码104个氨基酸。预测分子量为12.2kDa。序列分析发现一个典型的早期转录基序TATA位于起始密码子上游_7至-4nts处，预示其可能为早期基因。一个多聚腺苷酸加尾信号AATTT被发现位于终止密码子（TAA)下游+6nts处。用SignalP 4.0软件分析内部没有发现信号肽。此外，用ExPASy和EBI软件分析没有发现Bm65有修饰位点。如图2.1。核苷酸序列分析发现一个典型的早期转录基序位于5m65起始密码子上游第4至第7个核苷酸处，预示其可能为早期基因。一个