观察细胞的有丝分裂.DOC

观察细胞的有丝分裂 一、实验原理 有丝分裂是生物体细胞增殖的主要方式。在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而可以推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关。支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上。 细胞有丝分裂是一个连续过程，可分为前期、中期、后期和末期四个时期。有丝分裂在整个细胞周期中约占10％的时间，而其余大部分时间是处于细胞连续两次分裂之间的间期。 有丝分裂各时期染色体变化的特征简述如下： 前期：核内染色质逐渐浓缩为细长而卷曲的染色体，每一染色体含有两个染色单体。它们具有一个共同的着丝点；核仁和核膜逐渐模糊不明显。 中期：核仁和核膜逐渐消失，各染色体排列在赤道板上，从两极出现纺锤丝，分别与各染色体的着丝点相连，形成纺锤体。在中期染色体呈分散状态，便于鉴别染色体的形态 和数目。 后期：各染色体着丝点分裂为二，其每条染色单体也相应地分开，并各自随着纺锤丝的收缩而移向两极，每组有一组染色体，其数目和原来的染色体数目相同。 末期：分开在两极的染色体各自组成新的细胞核，在细胞质中央赤道板处形成新的细胞壁，使细胞分裂为二，形成二个子细胞。这时细胞进入分裂间期。 间期：细胞分裂末期到下一次细胞分裂前期之间的一段时期。在光学显微镜下，看不到染色体，只看到均匀一致的细胞核及其中许多的染色质。实质上间期的核是处于高度活 跃的生理生化的代谢阶段，为细胞继续分裂准备条件。 高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织。由于根尖取材容易，操作和鉴定方便，故一般采用根类作为观察有丝分裂的材料。 、 学习醋酸洋红染色法的操作技术，观察植物根尖细胞有丝分裂各个时期染色体的变化和特征。 三、 实验材料 洋葱（Allium cepa, 2n=16）的鳞茎。 蚕豆（Vicia faba，2n＝12）的种子。 四、实验用具药品 （一）仪器用具 显微镜、酒精灯、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、解剖针、木夹、吸水纸、标签、铅笔。 （二）药品试剂 无水酒精、95％酒精、8 0％酒精、70％酒精、1N盐酸、卡诺氏 （Carnoy’s）固定液(1份冰醋酸十3份无水酒精)、1％醋酸洋红染色液。 五、步骤 （一）取材 1．洋葱根尖 将通过休眠期的洋葱鳞茎搁置在盛满清水的烧杯上，在室温下（25℃左右）发根，待根长约2cm时，于上午10 时左右剪取。 2．蚕豆根尖 先将种子浸泡一天，待吸水膨胀后移到铺有几层湿吸水纸的培养皿内，上面盖两层湿纱布并加水少许，置18-20℃黑暗下40-50h。待根长至 1-2cm时，于上午10时左右剪取。 （二）预处理 为了获得中期分裂相较多的细胞，使染色体缩短、分散，便于压片观察，对剪下的根尖可采用冷冻进行预处理。 将根尖放入盛有蒸馏水的指形管中，置于冰水共存的冰瓶中，然后把冰瓶放到 0-3℃的冰箱内处理 24h。染色体数较多的实验材料可适当延长时间，但需注意勿使材料结冰。 （三）固定 经过预处理的材料冲洗干净后，用卡诺氏固定波固定24h，经固定的材料若不立即使用，可置95％酒精和80％酒精中各半小时，再换到70％酒精中，置于4℃下保存、如保存时间太长，需要重新固定后再用。 （四）解离 固定的材料换入蒸馏水中洗净，然后放入1N盐酸溶液中，在60℃下解离6-20min，以便胞间层的果胶类物质解体，使细胞易于分散，便于压片。材料经解离后，用蒸馏水洗涤数次，将材料中的酸洗净，以便染色。 （五）染色 用吸水纸将洗净的材料吸干，放入盛有1％醋酸洋红染液的指形管中染色2-4h。若只作临时镜检观察，可直接将材料置于载玻片上，滴上1滴 1％醋酸洋红染色后压片。 （六）制片 取一条根，置于载玻片上，切取根尖分生组织约1.5mm，加1滴醋酸洋红，盖上盖被片，包被吸水纸吸干多余染色液，用手指轻压，再用铅笔的橡皮头垂直轻敲，敲时不要移动盖被片。 （七）镜检 先用低倍镜寻找有分裂相的细胞，再用高倍镜仔细观察各时期染色体的行为和特征。