木荷抗稻瘟病菌活性皂的分离及其酸碱转化后活性概述.docVIP

　　木荷抗稻瘟病菌活性皂的分离及其酸碱转化后活性概述 第一章 综述 1 稻瘟病的危害 稻瘟病是一种对水稻产量具有毁灭性的病害之一，每年全球仅因稻瘟病造成水稻的减产就达到了 11%~30%[1]，在上世纪 90 年代末，我国稻瘟病的年发生面积均超过三百八十万平方公顷[2]，导致稻谷的产量损失高达数亿公斤。虽然早在公元 700 年前宋应星所著的《天工开物》中就记载过此病害，而且有资料显示在 1704 年的日本也发生了这一病害[3]。我国在 1993 年爆发了一场特大的稻瘟病灾害，爆发的面积达到了五百四十三点二万平方公顷。导致粮食损失接近十亿公斤[4]。近几年来，我国的西南地区、长江中游、东北等水稻种植作区持续爆发稻瘟病，稻谷损失达数亿公斤[5]。尤其是 2005 年黑龙江稻区爆发的稻瘟病，受损害的稻田面积高达六十万平方公顷，其中近四十六点七平方公顷绝产[6]。稻瘟病危害极大、毁灭性强、分布的范围又广，所以备受水稻科研工的普遍重视。稻瘟病又称稻热病，半知菌亚门梨形孢属，其病原是灰梨孢。一般呈有 1-3 个隔膜没有颜色的洋梨形，他的上生能产生分生孢子而其梗上不分枝，分生孢子的底部有脚孢。其孢子在萌发时，首先从细胞的两端产生芽管，芽管的顶端产生深褐色接近球形的附着孢，通过附着胞粘附在宿主细胞的表面上产生菌丝侵入宿主细胞从而侵染植株[7]。稻瘟病主要通过分生孢子和菌丝体附着于病谷和病稻草上过冬。露天积累的稻草是次年发病的发病主源，第二年一旦达到生长的适宜条件稻瘟病菌就会生长，发病后的组织会产生非常多的分生孢子，再通过风雨的传播进行扩散，从而扩大稻瘟病的发病范围。水稻的抗病性会因其品种的不同而有很明显的差异，不同的生理小种对不一样的水稻品种也存在着很大的区别。他可作用于水稻生长的每个生长期，对地上的部分尤其是叶片和茎危害很大，在水稻的整个生长周期中有三个周期是非常容易感染稻瘟病的。分别是幼苗的三叶期到五叶期、分蘖期和抽穗初期。根据他发病的时期和部位可以分为苗瘟、叶瘟、节瘟、穗瘟、枝瘟和粒瘟。最常见的是叶瘟和穗瘟，叶瘟的症状大概有慢热、急性、白点、褐点四种类型，他的类型、形状、色泽会因气候、品种的感病程度以及病斑的年龄等原因而有所不一样。节瘟主要发生在穗以下的节位上。 .. 2 木荷的化学成分研究 木荷Schima superba山茶科乔木，也叫荷树、荷木。主要生于海拔150～1500 米山谷，属于阴性植物，在土壤肥沃，气候湿润，排水良好的酸性土壤中长势良好，不适合碱性土壤里生长。在我国的江苏、浙江、安徽、江西、湖南、四川、贵州、云南、广东等省都有分布[9]。木荷被作为有毒植物被收录于中国植物图谱数据库，根皮辛温、能清热解毒，古时就有将木荷做为暗器，毒器的原药用于捕杀凶猛的动物，人接触后会发痒，皮肤也会出现红肿等不适反应[10]。木荷的适用性强，且常年绿色非常的具有观赏性，而且长势也好，能用作造材林，国内目前对木荷的研究还是主要集中在育林上[11,12]。高浓度的木荷有剧毒，低浓度却有很好的药效作用，我们实验室在用稻瘟病为指示菌筛选植物时发现在醇提物浓度为800mg/L时对稻瘟病的抑制率为100%[13]。邓志勇等[14]在用木荷树皮对小菜蛾的幼虫进行毒杀实验时，具有很好的杀虫效果。随后又对其做拒食活性实验，发现甲醇提取物浓度为2g/L时对小虫的拒食率接近100%[15]。骆悦等[16]从所选取的40 种植物在对福寿螺实验时发现木荷茎皮提取物有很强的杀螺作用。木荷的化学成分目前己报道的主要有木脂素、三萜皂甙类、水解鞣质及其它一些化合物。 . 第二章 木荷中活性物质的分离 1 材料1 1.1 植物样本和菌种 木荷树叶 于 2009 年 9 月~2009 年 12 月采摘于江西农业大学 稻瘟病菌 由江西省农业科学院植保所提供 R3 级份皂甙 实验室自制 PDA 培养基 土豆200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 自然 1.2 主要试剂 石油醚 60℃~90℃ 分析纯 天津市大茂化学试剂厂 无水乙醇 食用酒精 县盛源酒业有限公司 正丁醇 分析纯 西陇化工股份有限公司 甲醇 分析纯 天津市大茂化学试剂厂 无水乙醚 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 氯仿 分析纯 西陇化工股份有限公司 超纯水 实验室自制乙腈 色谱纯 国药集团化学试剂有限公司 富士一号 浙江威尔达化工有限公司 . 2 结果与分析 在加入不同的沉淀剂后，乙醚和丙酮产生的是絮状悬浮物，丙酮乙醚混合液产生的沉淀很沉实。丙酮乙醚混合液产生沉淀的质量最多，乙醚次之，最后是丙酮，因为纯化的目的是为了提高活性物质的纯度，已达到除杂的目的，所以试验中我们不能单独凭效价或者沉淀的质量来确定沉淀剂而应该是取效质比最高的沉淀剂做最佳的沉淀剂，乙醚的沉淀后活性物质的效质比最高，因此选乙醚做