中性脂肪酶在凹凸棒石表面固定条件优化及其活性 optimize condition and activities of neutrophil lipase immobilized by attapulgite.pdfVIP

第31卷第5期 太阳能学报 V01．31，No．5 2010年5月 ACTAENERGIAESOI．ARIsSINICA May，2010 中性脂肪酶在凹凸棒石表面固定条件优化及其活性 金 杰1，杨艳红2，吴克1，陈天虎3，王华林2，俞志敏1，刘斌1 (1．合肥学院应用酶学与工程重点实验室；城市固废处理与资源化利用安徽省T程技术研究中心，合肥230022； 2．合肥工业大学化学工程学院，合肥230009；3．合肥工业大学资源与环境工程学院，合肥230009) 摘要：以凹凸棒石为载体，采用吸附法，对脂肪酶进行固定化，研究了固定化条件对固定化脂肪酶催化活性的影 响，得到最佳固定化条件：给酶量为25900U／g，固定化温度为25℃，pH值为7．5，吸附时间为5h，此时固定化酶的活 力约为2800U／g载体。固定化酶的最适反应温度从游离酶的40。C下降至30。C，固定化酶的最适pH从游离酶的7．0 上升到7．5。固定化酶的热稳定性和pH稳定性较游离酶有了较大改善，其在60。C以下能保持75％以上的酶活，而 游离酶60℃残余酶活仅为20％。在pH为5．9的范围内，固定化酶的酶活能保持70％以上，而游离酶只能保持约 20％。用固定化的中性脂肪酶催化不同的油品，即大豆油、菜籽油及泔水油生产生物柴油，菜籽油的酯化率最高。 关键词：凹凸棒石；固定化；脂肪酶；生物柴油 中图分类号：TK6 文献标识码：A 纳米棒状形态的镁铝硅酸盐矿物，其棒状晶体杂乱 0引言 堆积形成纳米空隙，具有很大的比表面积、表面电荷 生物柴油是由可再生的动植物油脂与短链醇 和表面吸附活性n3’14J，对蛋白质具有较强的吸附性。 (甲醇或乙醇)经转酯化反应制得的脂肪酸酯(甲酯 凹凸棒石作为酶固定的载体具有巨大的潜在价 或乙酯)。它具有低硫量、低芳烃含量、极好地润滑 值n5|，但是以凹凸棒石作为酶固定载体并用于生物 性、可再生性和环境友好等优点【l刮，是一种优质的 柴油催化的研究较为少见。 清洁燃料，是石化柴油最理想、最有发展前途的替代 本研究以凹凸棒石作为固定化载体，用简单的 燃料。酶法合成生物柴油具有条件温和、醇用量小、 物理吸附法固定脂肪酶，研究了固定化反应条件对 产品易于收集、无污染物排放等优点，且此过程还能 固定化酶的催化活性和载体吸附蛋白量的影响，筛 进一步合成其它一些高价值的产品，包括可生物降 选得到最佳的固定化反应条件，并且对固定化酶的 解的润滑剂以及用于燃料和润滑剂的添加剂[4]。但 性质与游离酶进行对比，进行了分析。 目前存在以下几个问题：低碳醇转化率低，酶的价格 昂贵，难以回收且在反应过程中易失活【51等，很大程 1实验方法 度上限制了它在工业化生产中的应用。在商业和基 1．1脂肪酶的固定化 础酶学方面，固定化是酶经济再利用的关键步骤。 脂肪酶通过固定化后可以提高活力和稳定性，而且 取定量的凹凸棒石(由合肥工业大学资源与环 易于回收重复使用。吸附法是大规模固定化脂肪酶 境工程学院提供)加入定量的酶液(平均酶活力为 的最适方法怕qJ。 1850U／g，由合肥学院应用酶学与工程重点实验室提 生产生物柴油时，有机相中的固定化酶载体的 供)中，恒温水浴搅拌一定时间后，冷冻干燥，再用磷 稳定性非常重要。通常情况下，无机材料在有机相 中具有更好的稳定性，如硅藻土【9J。同时，也有研究 冷冻