贵州省蛇源曼氏迭宫绦虫结构和与宿主相容性的研究.pdfVIP

贵州省蛇源曼氏迭宫绦虫结构及与宿主相容性的研究 专业：病原生物学 研究生：陶梓璐 导师：陈 艳 教授 [摘要] 目的 观察贵州省王锦蛇源曼氏迭宫绦虫（成虫和裂头蚴）超微结构 特点，比较蛇源裂头蚴与四种宿主的相容性，优化裂头蚴皮层分离条件，并对皮 层蛋白组分进行分析。方法 1.采集贵州省安顺地区王锦蛇源裂头蚴标本，进行 形态学鉴定。将王锦蛇源裂头蚴口服法感染狗，饲养1 月后剖杀，获得曼氏迭宫 绦虫成虫标本。成虫与裂头蚴标本用日立S-3400 扫描电镜观察其超微结构； 2. 将检获的蛇源裂头蚴浸泡于10%～30%胎牛血清尿素（1M～4M ）皮质分离液中， 处理 1 h～4 h 后，观察皮层分离情况。对可溶性皮层蛋白进行 SDS及 Western blot 分析，筛选最佳皮层分离条件以及特异性蛋白条带；3.将裂头蚴感 染不同宿主（鼠、鸡、猪、犬），进行裂头蚴与宿主相容性的研究。主要观察指 标有宿主裂头蚴的感染率、感染强度、致死率及发育历期等。结果 1.超微结构 的观察。1.1 成虫超微结构 成虫头节呈指状，背、腹面上各有一条纵行的吸槽。 因颈部短而粗，使头节到颈部的转化不明显。整个成虫表面被微毛所覆盖，槽内 面的微毛呈丝状型，头节其余部位、颈部及链体表面均密布圆椎状棘状型微毛。 成节和孕节的结构基本相同，节片背面除微毛外无其他结构，腹面有5 条纵行的 丘团，每个丘团又由许多半球形颗粒组成。在节片腹面上部中央，从上而下,可 见雄性生殖孔、雌性生殖孔及子宫孔。有些节片可见到阴茎自雄性生殖孔伸出， 阴茎呈短圆柱状。生殖孔周围由许多生殖乳突围绕。1.2 裂头蚴超微结构 裂头 蚴扁平带状，前后二端略膨大，不分节，但表面有深的不规则的横向皱褶。顶端 中央有一横向凹陷，凹陷周围体壁呈唇状突起。体表的质膜内陷形成大小不等的 凹窝与沟纹。整个虫体体表密布微毛，微毛的长短不一。虫体前端的微毛为圆椎 状的棘状型，而体中段的微毛有二种类型，一种为圆椎状的棘状型，另一种呈剑 状的棘状型微毛，数量较少，镶嵌在圆椎状微毛中。虫体后端的中央也有一横向 凹陷，凹陷周围体壁也呈唇状突起，但较前端的扁平。2.皮层分离条件及可溶性 皮层蛋白分析 2.1 皮层分离条件 用含20%～30%胎牛血清的2M～3M 的尿素 溶液分离裂头蚴的皮层2～3 h，能成功将皮层与实质组织分离开。通过HE 观察， 皮层分离发生在基膜处。2.2 可溶性皮层蛋白的分析 皮层可溶性蛋白经 SDS共分离出 12 条蛋白带；相对分子质量（Mr ）范围在：9.8～178ku， 1 / 29 其中Mr24.5 、Mr35 、Mr50 、Mr170ku 为高丰度蛋白区带；经Wester Blotting 分 析：2 条带(Mr15 和Mr35ku)为蛇源曼氏裂头蚴皮层特异性蛋白条带，能被感染 小鼠血清识别。3.四种宿主与裂头蚴的相容性 裂头蚴感染小鼠后，小鼠裂头蚴 的感染率、回收率和致死率分别为100%、54%和7.6%，感染强度为1～5 ；鸡的 感染率、回收率和致死率分别42.86% 、4.76%和7.6%，感染强度为1～2 ；所有 的猪未能感染成功；狗成虫的感染率及回收率分别是 60%和 26% ，成虫的感染 强度为3～6 。在一只狗的皮下组织中发现有一条裂头蚴寄生。结论 1.不同虫株 会出现形态结构的差异，对正常组织结构的观察将为虫株的分类及病原学诊断奠 定基础。2.尿素能成功分离裂头蚴的皮层，在王锦蛇源裂头蚴的皮层可溶性蛋白 中，至少有2 条特异性蛋白条带能被感染小鼠的血清所识别。3.三种转续宿主对 裂头蚴的易感性依次为小鼠、鸡及猪，其中小鼠的相容性高于其他二种动物。狗 不仅是终宿主，同时也是转续宿主。 关键词：王锦蛇；裂头蚴；超微结构；皮层；相容性;单向凝胶电脉；免疫 印迹；扫描电镜 2 / 29 前 言 曼氏迭宫绦虫[Spirometra mansoni （Joyeux et Houdemer,1928 ）成虫主要寄生 在终宿主猫、犬等的小肠内，偶可寄生于人体小肠，其中绦期幼虫裂头蚴可寄生 人体引起曼氏裂头蚴病（sparganosis mansoni ）[1]。裂头蚴（plerocercoid ）可侵 害人体诸多部位，造成的损害远较成虫大，严重威胁着人体健康。曼氏裂头蚴病 分布甚广，多见于东亚和东南亚的朝鲜、日本、印度尼西亚、菲律宾、马来西亚 和越南等国；