转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因治疗肺癌的实验探究.pdf

y引口州牛 转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因治疗 肺癌的实验研究 An onthe ExperimentaIStudy TranscriptionaI Double Gene of SuicideGeneDrivenKDR Therapy by Promotor’nCanter Lung 博士后姓名 奎国卫 流动站名称 痘理堂皇痘理生理掌 研究工作起始时闻 至QQ墨生垦且垒立旦 报告提交日翘一 星QQ曼生§且 转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因治疗 肺癌的实验研究 博士后 车国卫 合作导师 周清华步宏教授 中文摘要 背景与目的尽管肺癌的化疗、放疗、手术和基因治疗取得了巨大的进步，但肺 癌仍是对人类健康威胁最大的恶性肿瘤。因此，研究和开发靶向基因治疗的新方法 和新技术，是提高肺癌治愈率和改善患者生存质量和预后的重要措施。近年来，肺 癌的基因治疗在临床前研究中取得了较好的治疗效果，但由于在靶组织中目的基因 表达效率低，靶向性和可调控性差，副作用大的缺点，而限制了其在临床上的应用。 肿瘤细胞或组织特异性基因治疗成为靶向性基因治疗的发展方向。为了探讨转录靶 向性KDR基因启动予调控的双自杀基因在肺癌靶向治疗中的作用及效果。 材料与方法 本研究应用基因工程技术构建了转录靶向性KDR基因启动子调控 转双自杀基因的细胞株；应用细胞培养技术检测了不同前药对转双自杀基因细胞株 的杀伤作用及旁观者效应，同时应用TuNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞 周期的变化；动物实验观察联合应用5-FC和GCV对转双自杀基因人高转移肺癌细 转移的影响。 本课题受国家自然科学基金重点项目扣中国博士后科学基金 (2004035697)资助 结果： 1．应用基因工程技术成功克隆了KDR基因启动子KDRp，经DNA序列分析证 明其碱基序列与理论值完全一致，并且其调控目的基因表达的转录活性与CMV启 的调控蛋白调节，从而指导表达KDR蛋白的细胞特异性地表达双自杀基因。 观察到不同肿瘤细胞株及人脐静脉内皮细胞株中KDR基因的表达水平不同。本研究 而HepG2细胞中无KDR基因表达。 3．应用质粒DNA的转化、酶切和连接技术成功构建了KDRp调控双自杀基因 4．体外实验结果表明：不同的前药特异性地对表达KDR和双自杀基因的细胞株 株(HepG2)无明显的细胞毒作用。说明受KDR届动子调控的双自杀基因可靶向的 杀伤KDR表达阳性的肺癌细胞株及肿瘤血管内皮细胞株。 5．旁观者效应检测表明：相同混合比例的转染双自杀基因的细胞株，5．FC用药 05)， 强于GCV组0D．∞^联合用药组的旁观者效应显著高于单独用药组(pn 当转双自杀基因细胞的比例为40％，两药出现显著的协同作用0D．05)。 G．流式细胞仪及TUNEL法的检测结果表明：应用不同的前药处理转染双自杀 2 肺癌株L9981细胞种植瘤的自发性肺转移咖nojj。 结 论：①KDR基因启动子不仅在人血管内皮细胞中具有转录活性，在人肺癌细 转录调控予。②KDR启动子可调控双自杀基因在KDR表达阳性的细胞株(L9981、 疗肺癌的效果显著优于单独用药，且联合用药具有显著的协同作用。④KDR基因 启动子调控的双自杀基因治疗为肺