试剂盒实验问题总结..docVIP

技术咨询问题 灵 敏 度 试剂盒能检测到待测抗原的最低浓度。（最小检出量） 检 测 下 限 试剂盒使用该样本的处理方法，能检测到样本中待测药物的最低含量 （检测下限=灵敏度*稀释倍数） 交 叉 率 指在同一测定方法中有两种以上的不同抗原对一种抗体同样特异性结合 回 收 率 （添加管浓度-空白管浓度）/添加量*100% 添加范围：检测下限以上~曲线最大浓度 最佳添加浓度：第三标准~第四标准浓度之间 单位换算：高标准100ppb添加10ul等于添加1ppb 样 本 处 理 采取样本：去除脂肪的匀浆样本 样本解冻：严禁直接放入水中解冻（由于多个样本和水的原因，可能造成假阳性），可室温放置或密封后放入水中解冻 试剂的配制，加入有机溶液的量，震荡时间严格按照说明书操作 离心：最终分离效果好，需要相层清澈透明 取相：靠壁轻吸所需相层，严禁吸到其它相层（其它相层可造成假阳性） 净化：加入正己烷净化，复溶液提取，充分混匀 酶 免 步 骤 加样点板 洗板 酶标仪的使用（450nm） 试剂盒注意事项 详见说明书 参见网址： 常见问题处理 出现问题 出现问题的原因 解决办法 曲 线 OD值不正常 试剂盒未回温 试剂盒回温到25℃ 温度控制不好 控制正确温度 孵育时间不准确 控制孵育时间 洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、 洗涤次数增加 洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干 阳光直射，对着风直接吹 避风避光 酶标仪的波长错误 酶标仪的波长450nm 抗体的稀释错误 正确的稀释抗体 水质问题 用娃哈哈矿泉水代替 白 板 洗涤液配制错误 正确的配制洗涤液 少加液体（抗体、酶标记物、A液、B液） 正确的步骤加液体 错加液体 无 梯 度 标准品也污染 换标准品点板 OD值不正常 控制温度时间在做一次 人为点板 / 线 性 不 好 OD值不正常 控制温度时间在做一次 人为点板 / 回 收 率 空白管阳性高 样本本身就是阳性样本 换阴性样本做回收率 空白管在实验中被污染 实验中防止交叉污染 水质原因 用娃哈哈矿泉水代替 偏 高 添加量不准确 精准的添加量 添加浓度不适合 添加合适的浓度 取液吹干量多 准确的取液吹干 取到其它相层液体 取需用相吹干 复溶液未稀释或加入量少 正确的稀释复溶液 偏 低 添加量不准确 精准的添加量 添加浓度不适合 添加合适的浓度 取液吹干量少 准确的取液吹干 复溶液稀释错误或加入量多 正确的稀释复溶液 出现问题 出现问题的原因 解决办法 假阴、阳性 水质原因 点复溶液验证 用娃哈哈矿泉水代替 实验操作原因 吸取到其它相吹干 准确的取液吹干 离心不彻底 延长离心时间 样本的污染 更换样本 乳化未处理完全 温浴（70℃）处理乳化现象 仪器试剂原因 离心管未清洗干净 正确的洗涤器具 有机溶剂的影响 做试剂空白看影响结果 衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质） 更换衍生化试剂 与曲线好坏相关 保证曲线的正常 金标检测（T）线颜色较浅 尿液pH偏碱性 用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。 尿样滴加过多 重新测定，尿样按照说明书，控制在2滴 尿液过于混浊 将尿液离心后，取上清液重新测定 金标质控（C）线不出现 检测卡由于高温、受潮等原因失效 尿样需要重新检测。 过了有效期失效。 该批号的金标应丢弃处理，尿液需要重新检测 操作过程中检测卡没有平放，导致液体样品直接冲过检测区 尿样需要重新检测，且检测卡平放于桌面上再加样。 尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质（比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等） 该尿液的检测结果无效 金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线 金标卡上的划痕；胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹； 该检测卡结果不可信，尿液需要重新检测。 实验重复性不好 操作人员的不一致，取样的不一致，样本数量的多少，加样时间的长短，洗涤条件不一致，加样量不一致 尽量保持的实验一致性 分析软件的使用 不能设置和保存 正确的设置和保存 如何判断曲线的好坏和分析结果 正确的判断曲线的好坏和分析结果