蓝浆果农杆菌介导法基因转化条件研究.pdfVIP

624 江苏农业学报 (Jiangsu ofAgr．Sci．)，2008，24(5)：624—628 蓝浆果农杆菌介导法基因转化条件研究 刘 捷， 杨丽娜， 章 镇， 蔡斌华， 陶建敏 (南京农业大学园艺学院，江苏 南京 210095) 摘要： 以蓝浆果品种蓝丰的叶片为转化受体，通过对农杆菌侵染时间、共培养时间、外植体暗培养时间、卡那 霉素(Km)选择压以及头孢霉素(Cef)浓度等因素研究，确定转化的最佳试验参数。试验结果：农杆菌侵染5min， 共培养4d，暗处理21d时gus基因瞬时表达率最高；在筛选初期添加Km20mg／L、Cef250mg／L，既能得到不定芽， 又达到筛选的目的。利用GUS组织化学染色、PCR扩增方法对蓝浆果的Km抗性植株进行检测，初步证实AtNHX1 基因已经整合到2株蓝丰株系基因组中。 关键词 ： 蓝浆果；农杆菌介导；基因转化；gus基因；PCR检测 中图分类号 ： $663．903．53 文献标识码 ：A 文章编号： lOOOAddO(2008)05-0624-05 Agrobacterium—mediatedTransformationFactorsofBlueberry LIUJie， YANGLi—Ha， ZHANGZhen， CAIBin-hua， TAOJian—min (CollegeofHorticulture， ngAgriculturalUniversity，Na ng210095，China) Abstract： Transgenicplantsweregeneratedfrom leavesofbluecropblueberrybyAgrobacterium—mediatedtransfor— mationwithAtNHX1gene，andthefollowingfactorsaffectingtransformationwereinvestigated：dippingtime，dark·cuhure time，co—culturetime，concentrationofkanamycin(Km)，andconcentrationofcefotaxine(Cef)．Byanalyzingthefrequen— cyofgusgenetransient—expressionandbudregenerationrate，theoptimaltransformationconditionswereworkedout：5min ofleafdipping，4dofco—cultureand21dofdark—culture．Resistantbudscouldberegeneratedandselectedonprimaryse- lectionmedium supplementedwithKm20mg／LandCef250mg／L．PCRandGUSanalysisconfimredthatAtNHX1gene wasintegratedintothegenomeoftwobluecropplants． Keywords： blueberry；Agrobacterium mediation；genetransfomr ation；gusgene；PCR analysis 蓝浆果 (Blueberry)，又名越桔、蓝莓，为杜鹃花 组织列为人类五大健康食品之一_2J。由于蓝浆果 科(Ericaceae)越桔属 (VacciniumL．)植物，多年生 基因的杂合性，使得传统的育种手段既费时又费 落叶或常绿灌木或小灌木，广泛分布于北半球，具有 力 J。转基因技术为 目的基因转入植物体提供了 较高的经济价值和广阔的开发前景…，它的营养和 有力的途径而且加速了育种进程。利用根癌农杆菌 保健价值高，果实含有防止脑神经衰老、增强心脏功 介导已获得许多转基因植物。这一方法受侵染时 能、明 目及抗癌等独特功效的物质，因此被国际粮农 间、共培养时间、基因型等多因素综合作用的影响。