流式细胞仪------FACSCantoFACSCanto之基本原.PDF

流式細胞儀流式細胞儀 FACSCantoFACSCanto 之基本原理與應用之基本原理與應用之基本原理與應用之基本原理與應用 產品專員產品專員 劉益年劉益年 美商必帝公司美商必帝公司美商必帝公司美商必帝公司 EE--mail : kenny_liu@mail : kenny_liu@ 大綱大綱 •• 實驗設計原理實驗設計原理實驗設計原理實驗設計原理 •• 流式細胞儀運作原理流式細胞儀運作原理 •• 儀器設定調整儀器設定調整 •••• 開開開開、、、、關機流程關機流程關機流程關機流程 實驗設計原理實驗設計原理 •• 藉由螢光抗體標識細胞之抗原特性藉由螢光抗體標識細胞之抗原特性 •• 藉由螢光化合物標識細胞特性藉由螢光化合物標識細胞特性 •• 藉由螢光染劑標識細胞特性藉由螢光染劑標識細胞特性藉由螢光染劑標識細胞特性藉由螢光染劑標識細胞特性 •• Cytometry Beads ArrayCytometry Beads Array 單一細胞特性之偵測單一細胞特性之偵測 單一細胞特性之偵測單一細胞特性之偵測 cyytokines structure enzymesenzymes AdhesionAdhesion Receptors Metabolic 淋巴球免疫分型淋巴球免疫分型 FITC PE 使用原理 CD45 CD14 儀器可自動依據CD45 與CD14 之免疫螢光染色，測量三群白血球的比 例，淋巴球(CD45 Bright /CD14-/Low FSC/ Low SSC) ，單核球(CD14+ /CD45 Intermediate/High FSC/Intermediate SSC) ，顆粒性球(CD14 dim/ CD45 dim/Higgh FSC/Higgh SSC)) ，細胞碎片與紅血球應是細胞碎片與紅血球應是((CD14-/CD45- /Low FSC/Low SSC) 。 IgG1 IgG1 / 根據陰性對照組之染色程度來劃分陽性 陰性之界線，依此界線在陰性 對照的樣品中，假陽性(Quardrant1+2+4)不得超過百分之二。 CD3 CD19 T CD3+ B CD19+ 細胞必須表達有 抗原， 細胞表達有 抗原。此兩群細 NK 胞與 細胞之總和應約略等於淋巴球的總數，可作為品管的指標。 CD3 CD4 CD4+ T 細胞必須同時表達有CD3+ 與CD4+ 抗原。 CD3 CD8 CD8+ T 細胞必須同時表達有CD3+ 與CD8+ 抗原。 CD3 CD16+ NK 細胞必須不表達有 CD3 抗原，同時表達有 CD16+ 或 CD56+ 抗原。 or CD56+ NK 細胞與T B 兩群細胞之總和應約略等於淋巴球的總數，可作