第10章 - 复制.ppt

生物化学与分子生物学 Biochemistry and Molecular Biology 李 冲 东201，lichong2006@ 徐州医学院;生命是什么？;遗传信息的传递 基因概念的提出 1858年，Mendel提出遗传因子决定生物性状 1909年，Johansen提出基因 1926年，Morgan发表《基因论》 中心法则的建立 1944年，Avery等证明“遗传物质是DNA ” 1953年，Watson和Crick提出DNA双螺旋结构学说 1958年，Crick提出“中心法则” 1970年，Temin发现反转录酶，丰富了中心法则;分子生物学的发展 1973年，重组DNA技术 1975-1977，DNA测序技术 1977年，重组基因的表达 1985年，聚合酶链式反应(PCR) 80’-90’，转基因动物、转基因植物 1991年，基因治疗 1996年，克隆羊多莉 1998年，RNA干扰(RNAi) 1990-2003，人类基因组计划;“中心法则”;第 10 章DNA 的 生 物 合 成 -- 复 制Biosynthesis of DNA -- Replication;第一节 DNA 复制概述 第二节 DNA 复制的酶学 第三节 原核生物的DNA 复制 第四节 真核生物的DNA 复制 第五节 DNA损伤与修复 第六节 RNA 指导DNA的合成;第一节 DNA 复制概述;1，DNA复制的化学反应 dNTP通过磷酸二酯键相连 合成的方向，5’?3’ ;2，DNA复制是半保留复制(semi-conservative replication) DNA在复制时，子代的DNA双链中一股单链是从亲代完整地接受过来的，另一股单链完全重新合成，由于碱基互补，两个子代的DNA双链和亲代DNA碱基序列一致。 半保留(semi-conservative),全保留(conservative), 混合式(dispersive);Meselson-Stahl实验证明半保留复制;3，DNA复制是半不连续复制(Semi-discontinuous replication)：DNA复制时，一条链的复制是连续的，另一条链的复制是不连续的。 前导链(Leading strand) 复制沿５’→3’ 顺着解链方向延长，复制过程连续的， 随后链或随从链（lagging strand） 另一条链的复制方向与解链方向相反，是不连续的。;半不连续复制的证据 冈崎片断(Okazaki fragments ) 随从链合成的不连续的小分子量的DNA片段。 在大肠杆菌复制过程中发现1000-2000 bp(真核生物生物中100-200 bp)的DNA片断，且可以连接成高分子DNA。;第二节 DNA复制的酶学;1，解螺旋酶(helicase) 作用：将DNA双螺旋解开 又名：Rep蛋白，DnaB蛋白 DnaA蛋白：辨认复制起始点 DnaC蛋白：辅助DnaB在起始点上结合并打开双链;2，拓扑异构酶(topoisomerase) 作用：松弛DNA超螺旋结构 既能水解，又能连接磷酸二酯键 拓扑酶Ⅰ 切断DNA双链中的一股 拓扑酶Ⅱ 切断DNA双链 ;3，单链DNA结合蛋白(SSB, single-strand binding protein) 维持模板处于单链状态 保护单链的完整;4，引物酶(primase) 一种RNA聚合酶，以DNA为 模板，合成一段短的RNA分子 （引物，primer），提供3’-OH 使新DNA链合成。 引发体（primosome）： Dna A辨认复制启始点，再结合Dna B, Dna C及其他复制因子，和引物酶一起形成复合体，DNA复制准备就绪。新的DNA链在DNA聚合酶的催化下生成。 ;5，DNA聚合酶(DNA polymerase) 催化磷酸二酯键形成,按碱基互补原则沿5’?3’方向延长新链 复制的保真性 1. 遵守严格的碱基配对规律 2. 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能 3. 复制出错时的校读功能 ;复制的保真性与DNA聚合酶的三种酶功能 5’?3’聚合酶活性 3’?5’外切酶活性： 识别、切除错配的碱基 5’?3’外切酶活性： 切除引物、突变片段 ;原核生物的DNA聚合酶 原核生物三种DNA聚合酶之比较;钝断琐漠挖浆刻持陛桶襟巡绩黍解缕丙焙垄斋协殉殊毙控杭言椿消汾管肖第10章 - 复制第10章 - 复制;真核生物的DNA聚合酶 已发现五种 α 与随从链的合成有关 β 核酸外切酶活性 与修复有关 γ 存在于线粒体 δ 与领头链的合成有关 ε 与