egr-1对app基因表达的调控作用 - 中国细胞生物学学报.pdf

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2015, 37(1): 39–46 DOI: 10.11844/cj cb.2015.01.0334 APP Egr-1对 基因表达的调控作用 1# 2# 2 1 2 2 1 1* 马 琳 周 瑜 李永玲 柴 娟 贾中发 郭 克 孙 涛 崔建奇 1 2 ( 宁夏颅脑疾病重点实验室, 省部共建国家重点实验室培育基地, 银川750004; 宁夏医科大学基础医学院, 银川750004) APP 摘要 该研究构建了含有 启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒, 将 该质粒与Egr - 1真核表达载体p CDN A 3-Egr - 1共转染到HEK2 93 与U 87M G 细胞中进行荧光素 APP chromatin 酶活性测定, 以确定Egr- 1对 基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验( immunoprecipitation assay, ChIP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)确 定Egr-1蛋白在APP 启动子上的结合部位, 同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和 butyrate诱导内源性Egr- 1的表达以及Egr- 1抑制剂suramin来作用于细胞, 通过蛋白免疫印迹分析 APP ′ (Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示, Egr-1蛋白在 基因启动子上5 UTR 区 APP 域有特异性的结合部位, 去除该结合部位则Egr-1失去对 基因启动子的调控作用, ChIP和EMSA 的结果也证实了该结合位点; 通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr- 1的表达则显著影响了 APP Egr-1对 基因表达的调控作用。 关键词 Egr-1; 淀粉样前体蛋白; 阿尔茨海默病; 基因表达调控 Regulatory Effects of Egr-1 on APP Gene Expression 1# 2# 2 1 2 2 1 1* Ma Lin , Zhou Yu , Li Yongling , Chai Juan , Jia Zhongfa , Guo Ke , Sun Tao , Cui Jianqi 1 ( Ningxia Key Laboratory of Cerebrocranial Diseases, the Incubation Base of National Key Laboratory, Yinchuan 750004, China ;