h5n1亚型禽流感病毒m 基因的克隆与分子进化分析 - 厦门大学学报 .pdfVIP

第 47卷 　增刊 2 ( ) Vol. 47　Sup. 2 厦门大学学报 自然科学版 2008年 12 月 Journal of X iam en U n iversity (N atural Science) D ec. 2008 H5N1亚型禽流感病毒 M 基因的克隆与分子进化分析 张国广 , 李东霄 , 张辉煌 , 陈元婷 , 陈　亮 (厦门大学生命科学学院 ,细胞生物学和肿瘤细胞工程教育部重点实验室 ,福建 厦门, 36 1005) 摘要 : 以一株 H5N 1亚型禽流感病毒 RNA 为模板 ,用 R TPCR 方法 ,扩增 M 基因全长 ,将 PCR 产物克隆于 pMD 18T载 体 ,测序结果表明所克隆的 982个核苷酸的片段包含了 M 1和 M 2基因的完整阅读框架 ,通过软件推导 M 1和 M 2 基因分 别编码 252和 97个氨基酸 ,将 M 全长序列与 Genbank 收录的 10株 H5N 1亚型流感病毒 M 基因序列进行比较 ,病毒株之 间 M 基因核苷酸序列同源性为 92. 3% ～99. 3% ,编码的两个蛋白M 1和 M 2氨基酸序列间同源性分别为为 96. 0% ～98. 8%和 92. 9% ～99% ,分子进化分析揭示了病毒株间的亲源关系. 关键词 :禽流感病毒 ; R TPCR ; M 基因; 分子进化分析 中图分类号 : Q 785; S 852. 65　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :(2008) S2 00 1605 ( ) [ 34 ] 　　禽流感病毒 A vian Influenza V iru s, A IV 属于正 酸序列高度保守 ,与 HA 蛋白比较 , 同样为外膜构 粘病毒科 、流感病毒属 、A 型流感病毒. 国际兽医局动 成蛋白的 M 2 只是一个小蛋白,但 M 2 蛋白在受病毒感 ( ) 物流行病组织 O IE 根据该病毒引起家禽发病的程 染的细胞内是高丰度表达的 ,文献报道 M 2 蛋 白的 N 度 ,将其分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感 ( ) 端 24 个氨基酸残基 膜外 区 与一些大分子相连 病毒 , 目前高致病性禽流感病毒只在 H 5和 H7 亚型中 接 [ 56 ] 或 M 2 蛋白单独表达 [ 78 ] 均能诱导机体产生 M 2 ( ) 发现. 1997年香港禽流感病毒 H 5N 1亚型 突破种间 蛋白特异性中和抗体 ,M 2 蛋白的抗体能够抑制禽流感 屏障 ,直接感染人并导致 6人死亡事件的发生 [ 1 ] ,使得 病毒的复制. 同时 M 1和 M 2 蛋白也能诱导机体的细胞 对该类病毒的研究在公共卫生学上具有更重要的意 免疫反应 ,产生免疫保护 ,并且这种保护具有较好的亚 义. 型间交叉保护能力 [ 5, 89 ] . 鉴于 M 基因的克隆对于禽流 A IV 是分节段的 RNA 病毒 , 内部基因由 8条负链 感基因工程诊断抗原制备和新型长效 、广谱