倪坤仪-分析化学（二）第十八章 平面色谱法.docVIP

第十八章 平面色谱法 基本内容和要求 一、 要求 本章重点掌握薄层色谱和纸色谱的原理，常用的固定相和流动相，比移值与相平衡参数、分配系数、容量因子的关系。吸附色谱中固定相和流动相的选择，平面色谱中比移值与分子结构的关系。薄层色谱中薄层板的种类，显色方法。 熟悉平面色谱法分类，各色谱类型中组分出峰顺序，影响薄层色谱流速的因素，面效参数与分离参数，荧光薄层板，边缘效应，定性定量分析。 一般了解各种色谱类型的操作方法，正相色谱与反相色谱的区别，薄层扫描法，高效薄层色谱法，应用与示例。 二、基本内容 1． 平面色谱法主要包括薄层色谱法和纸色谱法，由于其色谱分离是在薄层板上和纸平面上进行，所以称为平面色谱法。 2．薄层色谱法是一种开放型色谱。在薄层色谱中，展开剂的流速是一变数。展开剂在薄层中的流速与展开剂的表面张力，粘度及吸附剂种类、粒度、均匀度等有关，也和展开距离有关。展开剂的粘度越大，展开速度越慢；吸附剂颗粒越细、越均匀，展开速度越慢；展开距离越长，展开速度越慢；温度低使展开剂粘度变大，而使展开速度变慢。 3．薄板种类 薄板可分为硬板和软板，硬板根据所用的粘合剂不同，有硅胶-CMC板和硅胶-G板，它们分别采用羧甲基纤维素钠和煅石膏为粘合剂。荧光薄层板是在制板过程中掺入少量荧光剂制成的。 4．吸附薄层色谱中展开剂的选择原则 根据被测物质的极性，极性大，选择吸附剂的活度要小，而流动相极性要大。反之则相反。分离极性物质，加大展开剂的极性，会使极性物质的比移值变大。 5．薄层色谱操作步骤主要有铺板、点样、展开、显色、定性、定量等。显色方法主要有日光下有色、紫外灯下（254nm或365nm）观察暗斑或荧光斑点、荧光薄层板上检测和显色剂显色四种。定量方法有目视比较法、洗脱法和薄层扫描法三种。 6．高效薄层色谱法所用的吸附剂粒度比经典薄层色谱要小得多，一般为5μm和10μm。颗粒分布均匀，用喷雾法制板，称为高效薄层板。常用有硅胶、氧化铝、纤维素和化学键合薄层板。 7．薄层扫描法是用一定浓度、一定强度的光束照射薄层上的色点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。用双波长测定法，要选择测定波长和样品波长，一般用反射法测定。扫描方式可分线性扫描和曲折形扫描两种。 重点和难点 一、基本名词术语 比移值（Rf）与相对比移值（Rr） 相平衡参数：分配系数（K）与容量因子（k） Rf与K、k的关系 面效参数：理论塔板数（n）与塔板高度（H） n=16(L/W)2 H=L0/n 分离参数：分离度（R）与分离数（SN） R=2（L2-L1）/（W1+W2） SN=L0/（b0+b1）-1 二、主要色谱类型 色谱类型 分离原理 载体 固定相 流动相 流出顺序 吸附薄层色谱 吸附 硅胶 有机溶剂 极性小的Rf值大 正相薄层色谱 分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的Rf值大 分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的Rf值小 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的Rf值大 展开剂前沿移动色速度（Uf） Uf随L变长而变慢，并与k有关 k与填料颗粒直径、展开剂表面张力、展开剂粘度直接有关，因此Uf随颗粒粒度变小，展开剂表面张力变小，粘度变大而使Uf变慢。 第三节 精选例题 1．怎样选择薄层色谱的展开剂？应从哪些方面考虑？ 答：主要应根据被分离物质极性、展开剂极性以及吸附剂的活度三方面来选择。 被分离物质极性 展开剂极性 吸附剂的活度 大 大 小 小 小 大 一般可选用单一溶剂展开，根据Rf大小，进一步调整展开剂的种类或选用二元、三元展开剂。 分离酸性物质，可在展开剂中加入少量酸性溶剂，如甲酸、乙酸等 分离碱性物质，可在展开剂中加入少量碱性溶剂，如氨水、乙二胺等。 2．吸附薄层色谱中，欲使被分离组分（极性）Rf值变小，一般可采用什么方法？ 答：（1）展开剂极性变小，降低极性溶剂的比例或增大非极性溶剂的比例。或变换有机溶剂的种类，使用极性更小的有机溶剂。 （2）吸附剂活度变大，即含水量减少。也可在薄层活化时，适当提高活化温度和延长活化时间。 3． (1)从原理上分类，薄层色谱法一般属于什么色谱？分别讲出一种常用的固定相和流动相。（2）极性大的组分Rf值也较大，此话对吗？说明理由。（3）在薄层色谱中的流速是否是恒定的？试说明影响薄层色谱流速的因素主要有哪几个？ 答：（1）从原理上讲，薄层色谱一般属于吸附色谱，常用的固定相，如硅胶；常用的流动相，如氯仿、甲醇等。 （2）极性大的组分Rf 也较大，此话不对，因极性大