新加坡石斑鱼虹彩病毒icp46 核输出信号序列的定位与功能 - 水产学报.pdfVIP

第36 卷第 11 期 水 产 学 报 Vol.36, No.11 2012 年 11 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Nov., 2012 文章编号: 1000-0615(2012)11-1763-07 DOI:10.3724/SP.J.1231.2012.28052 新加坡石斑鱼虹彩病毒 ICP46 核输出信号序列的定位与功能鉴定 1 1,2 2* 夏立群 , 张红莲 , 秦启伟 (1. 广东海洋大学水产学院, 广东 湛江 524088; 2. 中国科学院南海海洋研究所, 中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室, 广东 广州 510301) 摘要 : 新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)是一种重要的鱼类传染性病毒, 可导致石斑鱼死亡率 达90% 以上, 给石斑鱼的养殖造成巨大的经济损失。SGIV ICP46(infected cell polypeptides 46) 是一个立即早期基因, 可能参与细胞的生长调控, 并对病毒复制有重要作用。在SGIV ICP46 序列中存在一段富含亮氨酸(Leucine, L) 的潜在核输出信号(nuclear export signal, NES)。为了 深入研究该段NES 序列在SGIV ICP46 核转运过程中的作用, 实验构建了3 个NES 缺失的 突变体: 仅含NES 之前片段的突变体(ΔNESa) 、仅含NES 之后片段的突变体(ΔNESb)和不含 NES 的全长片段(ΔNESc), 并在真核细胞中表达, 观察这些突变体在细胞内的定位情况。转 染细胞实验结果表明, 野生型EGFP-ICP46 重组蛋白可以有效地被输出细胞核, 荧光信号主 要分布在胞质区; 相反, NES 缺失的EGFP-ICP46-ΔNES 重组蛋白不能被有效地输出细胞核, 呈现与EGFP 对照相同的泛细胞分布特征。突变实验证明, NES 对SGIV ICP46 输出细胞核 具有决定性作用。 关键词: 新加坡石斑鱼虹彩病毒；ICP46 ；核输出信号; 绿色荧光蛋白 中图分类号: Q 785; S 917.4 文献标志码: A 新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iri- 能参与细胞生长调控, 并对病毒复制有重要作用[6] 。 dovirus, SGIV)是 2001 年分离自石斑鱼(Epinephelus 虹彩病毒科全基因组测序的比较基因组研究揭示 tauvina) 的一种能引起全身性疾病的病原体, 该病 ICP46 是虹彩病毒科的核心基因之一[18], 可能在虹 毒可导致石斑鱼死亡率达90%以上[1-2] 。目前SGIV 彩病毒科病毒感染过程中具有重要作用。 的快速检测、培养鉴定、全基因组、转录组、蛋白 由于虹彩病毒利用宿主细胞的细胞核与细胞 质组等相关基础研究已经完成[3-5], 对 SGIV 重要 质进行其生命复制周期中的不同事件, 因此对于 [6-13] 功能基因的研究正陆续展开 。 病毒蛋白在细胞内的定位可以为其功能研究提供 立即早期基因(immediate early gene, IE 基因) 非常有用的线索。绿