利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌groel 蛋白复合物.pdfVIP

微生物学通报 DEC 20, 2011, 38(12): 1848−1854 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 生物实验室 利用串联亲和纯化技术分离大肠杆菌 GroEL 蛋白复合物 1,2Δ 2Δ 2 1,2 2 2 2* 2* 1* 魏波 廖翔 周围 王羽 李玉霞 高原 岳俊杰 梁龙 呼和巴特尔 (1. 010018) (2. 100071) 摘 要: 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 是一种重要的致病菌, 加深其致病机理的基础研究将为相关 疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然 状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自己构建的原核表达串联亲和标签 载体, 在大肠杆菌 O157:H7 中表达了标签融合蛋白GroEL-TAP, 建立了非变性条件下制备蛋白复 合物的方法, 并且对串联亲和纯化过程中的相关实验条件进行了探索和优化, 最终得到了高纯度 的 GroEL-TAP 与天然 GroEL 形成的嵌合型多聚体复合物。这表明我们建立的串联亲和纯化技术 能高度特异地纯化靶蛋白参与形成的复合物, 为后续寻找O157:H7 中毒力蛋白参与形成的复合物 奠定了实验基础。 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157:H7, 串联亲和纯化(TAP), 分子伴侣GroEL Application of tandem affinity purification technique for separation of GroEL complexes in Escherichia coli WEI Bo1,2Δ LIAO Xiang2Δ ZHOU Wei2 WANG Yu1,2 LI Yu-Xia2 GAO Yuan2 2* 2* 1* YUE Jun-Jie LIANG Long HUHE Bateer (1. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia agricultural University, Hohhot, Inner Mongolia 010018, China) (2. Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China) Abstract: Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 is a kind of important pathogenic bacterium, and deeper studies of molecular pathogenesis will contribute better to related vaccine research and dis- ease control. Tandem affinity purification (TAP) technique is a kind of new method which was recently developed and used to separate and purify native protein complexes and so o