用于提高体内外基因转染功效的亚油酸及聚苹果酸双接枝壳聚糖新型纳米载体.pdfVIP

乡旨惬矜刁、奚且月忆员 名 肩良 印 春 华 教 授 目 录 摘 要 ……I A b strac t……I 前 言 ……，……1 1 材料 和仪器 ……4 2 实验 方法 ……6 2.1 L M C 聚合物 的制 备 ……6 2.2 LM C 纳米粒 的制 备和表 征 ……8 2.3 PE G FP 质粒 的制备 ……9 2.4 L M C /PE G FP 纳 米 复合物 的制 备 ……9 2.5 L M c /PE G FP 纳 米 复合 物 的粒径 和 Z eta 电势 ……9 2.6 透 射 电镜 ……9 2.7 凝胶 阻滞 ……9 2.8 包封 率测 定 ……10 2.9 核 酶 抑 制 ……10 2.10 非特 异性 蛋 白吸 附 ……10 2.n 血 红 细胞 勃 附 ……，…… 11 2.12 细 胞 摄 取 ……12 2.13 细 胞摄取机 制 ……12 2.14 E B 排 阻 ……13 2.15 pE G F P 释 放 ……13 2.16 亚 细 胞 分 布 …… 13 2.17 体 外 细胞转 染 ……，……14 2.18 体 内转 染 …… 14 3 结 果 与 讨 论 …… 16 3.1 L M C 纳 米 粒 ……，…… 16 3.2 L M C/PE G FP 纳 米 复合物 的制 各和 表 征 ……18 3.3 透 射 电镜 …… 19 3.4 凝 胶 阻滞 ……20 3.5 包 封 率 ……20 3.6 核 酶抑 制 ……21 3.7 非特 异性蛋 白吸 附 ……23 3.8 细胞 勃 附 ……，...……24 3.9 细 胞 摄 取 ……26 3.10 细 胞摄 取机 制 ……，……27 3 .n E B 排 阻 ……2 8 3.12 PE G FP 释 放 ……29 3.13 核 质 分 布 ……30 3.14 体 外转 染 ……，……，……33 3.15 体 内转 染 ……，……，……36 总 结 与展 望 ……，.，..…，，..…，……4 0 参考 文献 ……42 致谢 ……4 7 个人 简 历 ……48 综述 壳聚糖类 基 因非病 毒载体 4 O/ 摘 要 摘 要 外源基 因实现 治疗潜 能需合适 的递送载 体 。壳聚搪生物 相容 、生物可 降解 ， 在基 因递送 中显示 巨大 的潜 力 ，但 壳聚糖/PD N A 纳米 复合物转 染效率低 ，需功 能化 修 饰 ， 以克服基 因递送 屏 障 。亚 油酸和 聚 苹 果酸 双 接 枝 壳 聚糖 (LM C ) 聚 合物 是疏 水 性亚 油酸和 亲水 性 聚苹 果酸修饰 壳 聚糖 而 成 的两 亲性 壳 聚糖 衍 生物 ， 水 中可 自组装 形 成 LM C 纳米粒 。结合 亲 水修饰和 疏水修 饰 的特 性 ，可用 作基 因 的高效递送 载体 。 合 成 不 同亚 油 酸 和 聚苹 果酸接 枝 比的 L M C 纳 米 粒 ，包载 表 达绿色 荧 光 蛋 白 的模 式质粒 pE G FP ，制备 LM C/pE G FP 纳米 复合物 ，考察 LM C 亲水修饰和疏水 修饰 与 LM C /PE G FP 纳米 复合物 的构效关系 ，研 究纳米 复合物体 内外转染效率 。 1 L M C 纳米 粒合 成 与表 征 选 择 合 适投料 比合 成 不 同亚油酸和 聚苹 果酸接 枝 比的 LM C (LM cl 、LM C Z 、 LM C 3 和 LM C 4) 纳米 粒 ，分 别测 定接 枝 比、细胞毒 性 、接 触 角 、粒 径和 Z eta 电势 。LM CI 、LM C Z 、LM C 3 和 LM C 4 纳米粒 的亚油酸 接枝 比分别为 23 .3% 、 46 .6% 、70 .0% 和 73 .3% ，聚苹 果酸接枝 比分 别为 3%