水稻幼嫩根尖常规石蜡切片制作技术改良.PDFVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１２期 — ７１— 张新梅，董晓英，沈仁芳．水稻幼嫩根尖常规石蜡切片制作技术改良［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１２）：７１－７３． 水稻幼嫩根尖常规石蜡切片制作技术改良 １，２ １ １ 张新梅 ，董晓英 ，沈仁芳 （１．中国科学院南京土壤研究所／土壤与农业可持续发展重点实验室，江苏南京２１０００８；２．中国科学院大学，北京 １０００４９） 　　摘要：采用优化的石蜡切片制作方法，对不同苗龄水稻根尖进行石蜡切片与徒手切片，比较福尔马林 －醋酸－乙 醇（ＦＡＡ）、卡诺氏和４％多聚甲醛３种不同固定液，以及不同固定时间的固定效果，试验结果表明：卡诺氏固定液固定 的根系变形、细胞皱缩；４％多聚甲醛固定液固定的根系结构与徒手切片一致，固定水稻幼根的时间以１．５ｈ为最佳； ４％多聚甲醛固定液的固定效果最好，优于ＦＡＡ和卡诺氏固定液。 　　关键词：石蜡切片；固定效果；固定液；徒手切片；固定时间 　　中图分类号：Ｑ９４－３４　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１２－００７１－０２ 　　石蜡切片技术是组织学常规制片技术中经典、应用最为 ０．１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ值为７．２的磷酸缓冲液）。 ［１－２］ 广泛的方法 。常规的石蜡切片方法耗时长，从取材固定 染色液：埃利希（Ｅｈｒｌｉｃｈ）苏木精染液；１％伊红水溶液。 到封片制成玻片标本需要 １周左右的时间，在实际应用中受 １．３　方法 到诸多限制。在许多应用领域，都对常规石蜡切片制片技术 １．３．１　取材和固定　用锋利的刀片在水稻根基部 １．５ｃｍ处 进行了改良，极大地缩短了石蜡切片的制作时间，例如适用于 切取２ｍｍ的小段，分别放入 ＦＡＡ、卡诺氏固定液和４％多聚 临床病理诊断的微波快速切片方法和超声波快速切片方 甲醛固定液中，分别固定２０ｍｉｎ、１．５ｈ和２４ｈ。卡诺氏固定 法［３－４］，适用于免疫组化染色的快速石蜡切片方法［５－６］等。 液需要当天配制，多聚甲醛固定后用０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ值７．２ 然而，石蜡切片制作方法是针对一般的组织材料，对于特殊的 的磷酸缓冲液冲洗。 组织材料，因组织学特性差异，不能完全适用，由于植物材料 １．３．２　脱水和透明　ＦＡＡ固定后，于５０％、７５％、８５％、９５％ 与动物材料性质不同，微波快速切片、超声波快速切片等方法 的乙醇中进行梯度脱水；卡诺氏固定液固定后，于８５％、９５％ 在植物上应用还比较少。 的乙醇中进行梯度脱水；多聚甲醛固定后，于 ３０％、５０％、 植物幼嫩根尖组织在一些逆境胁迫中如铝毒害，是最敏 ７５％、８５％、９５％的乙醇中进行梯度脱水。各梯度脱水时间为 ［７］ 感、最早做出胁迫反应的部位 ，因此，幼嫩根尖组织观察在 １０ｍｉｎ，最后均在无水乙醇中脱水２次，首次 １０ｍｉｎ，第２次 研究植物胁迫反应及抗性中具有重要的作用。对于幼苗根尖 ５ｍｉｎ。然后，依次转入二甲苯和无水乙醇之比为１∶２、１∶１、 这类幼嫩组织的切片制作，常规的固定、脱水、透明、渗蜡等过 ２∶１的混合液中分别透明１０ｍｉｎ。最后，转入纯二甲苯中透 程不仅时间过长，工作效率低，且易对组织造成损伤。为此， 明２次，每次约５ｍｉｎ，至根尖透明为止。为了便于定位透明 针对水稻幼嫩根尖细胞含水量高、细胞壁纤维素含量较低及 后的根尖，可以在９５％的乙醇梯度脱水时加入０．１％的伊红 组织柔软的特点，对水稻幼嫩根尖切片的制作技术进行研究， 水染液。注意严格控制乙醇脱水和二甲苯透明时间，防止组 以期为组织形态学研究提供基础资料。 织变硬、变脆影响切片效果。 １．３．３　包埋和切片　经