血清小分子肽的分离及生物活性检测.pdfVIP

分类号Q2§圣 密级 学校代码!Q§垒2 血清小分子肽的分离和生物活性检测 Isolation and testof bioactivity small peptides 指导教师姓名、职称 鋈堡垒整撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一一年四月 I ㈨UlIFillII IIIIIF PIllI 911 {Y1911 摘 要 背景和目的： 血清包含许多种肽，其中一些具有生物活性，在生理调节过程 中起重要作用。由于相对分子质量lk,--3kDa区间的血清肽含量极低， 分离纯化困难，因此对其组分及其功能所知甚少。本研究旨在检测 血清lk3kDa超滤组分的生物活性，分离和纯化其中的小分子肽， 为阐明血清肽组成分及其生理意义提供实验证据。 方法： 将血清作串联超滤，截取lk,--3kDa的浓缩组分。进行小鼠骨髓 成纤维细胞集落形成单位(CFU．F)及粒系．巨噬系造血组细胞 内皮细胞株(孙7EVC)细胞培养，采用集落计数、细胞计数、MTT 比色法和流式细胞技术，检测血清1k-一3kDa超滤组分对细胞生长和 活力的影响。进行血清lk,-,3kDa超滤组分的C18反相高效液相色谱 (C18 RP．HPLC)分离，然后对分离的纯化肽进行质谱分析，并用 所获质谱数据作蛋白质／肽信息库搜索鉴定。 结果： 积分数组的集落产率显著高于对照组，10％体积分数组的集落产率 与对照组之间的差异无显著性，15％、20％、30％超滤组分体积分数 组的集落产率反而显著低于对照组。 (2)CFU．F集落形成实验显示，与对照组比，10％、15％、20％、 30％体积分数组的集落产率显著减低；而集落之间的骨髓基质细胞 显著增多。 (3)骨髓基质细胞在血清lk～3kDa超滤组分体积分数为20％的 条件下培养48h后，Gl期细胞的百分率降低，S期细胞的百分率增 古 同o 培养体系，10％，15％，20％，30％体积分数组3T3细胞计数明显低 于对照组；各体积分数组的MTT吸光值也显著低于对照组。在血清 S期百分率降低，G2／M期百分率增加。 HUEVC细胞生长和活力无明显影响。 (6)血清1k～3kDa超滤组分的C18 RP．HPLC图谱上有20多个 215nm波长吸收峰，一级质谱检测发现27min洗脱峰为高纯度 1 谱数据在蛋白质／肽库中未检索到对应信息。 结论： 血清lk～3kDa超滤组分含有多种小分子肽，在体外培养条件下， 这些血清成分对不同细胞具有选择性的促进或抑制增殖的作用，并 有一定的量效关系。相对分子质量分别为1793Da和2062Da的血清 肽可能是两种新发现的肽。本研究的结果将为血清肽组成分及其功 能的深入研究提供有价值的参考。 关键词：血清；小分子肽：分离；生物活性 IT ABSTRACT and Backgroundpurpose： Serumcontains a numbero