草鱼促性腺激素基因原核表达和多克隆抗体的制备.pdfVIP

分 学 研 究 生姓名 塞!j 堕 指导教师姓名、职称 奎建主：割塾撞 学 科 专 业 盈堑堂 研 究 方· 向 邈堑生墨堂 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一一年四月 IIII I IIIIIIlllI ll III Y1911 1 90 摘 要 促性腺激素(GonadotropinHormone，GTH)是由脊椎动物垂体 Gland，PG)前叶细胞合成与分泌的一类糖蛋白激素 (Pituitary (Glycoprotein 长、发育、成熟、排精及排卵。鱼类存在两种类型的GTHs，即GTHI Hormone，FSH)矛I促黄体生成素(Luteinizing 一个二聚体分子，由共同的含抗原决定因素的n亚基和激素生物学特 异性的p亚基组成，两个亚基只有结合在一起才能发挥激素的生物学 活性。鱼类的生殖周期主要由下丘脑．垂体．性腺轴调控，而垂体分泌 的促性腺激素在鱼类的生殖周期调控中占据中心地位，是促进性腺发 育与成熟的关键性激素。 idella)作为实验材 本研究选用草鱼(Grasscarp，Ctenopharyngodon 料，从草鱼脑垂体中提取总RNA，设计合成三对草鱼促性腺激素基因 transcription chain polymerase 码118，130和146个氨基酸。 的ORF序列，构建成N端含有GST融合蛋白标签的表达质粒，分别转 苷)诱导下表达出3个融合蛋白，SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融 蛋白进行Westemblot鉴定，结果显示重组蛋白表达正确。利用制备型 SDS．PAGE纯化、回收的蛋白分别免疫新西兰大白兔，制备了抗GTHIx 和抗FSHp的两个具有较高效价的多克隆抗体。 本研究首次选用融合表达载体pGEX．4T-1作为草鱼促性腺激素 基因的原核表达工具，成功构建了重组GTH原核表达质粒，表达出草 鱼重组促性腺激素。为进一步阐明促性腺激素在硬骨鱼类生殖周期调 控中作用的分子机制、完善鱼类(特别是鲤科鱼类)的繁殖内分泌学 研究具有重要的理论意义，而且在实践中可以为草鱼的人工繁殖提供 一条新的催产途径，有重要的应用前景。 关键词：草囱__(Ctenopharyngodonidella)，促性腺激素，基因克隆，原 核表达，多克隆抗体 hormones ofacommonsubunitanda glycoproteincomposed alpha hasits subunit，which hormone-specific13 biologicalspecificity．The hormonal is afterthesetwosubunits activityexpressedonly binding