花生2s蛋白特性和其在萌发过程中的动员研究.pdfVIP

华南师范 花生2s蛋 过程中的动员研究 黄叶可 导师姓名职称： 宾金华教授 专 业： 生物化学与分子生物学 院 系： 生命科学学院 答辩时间： 2010．5．27 onth Study - ■ II mobilizaII andMolecular Speciality：Biochemistry Biology ofLifeScience College： College Bin Supervisor：ProfessorJinhua SubmittedDate：May27，2010 花生 申请者姓名：黄叶可 导师姓名：宾金华 摘要 以花生(ArrachisL．)汕油523种子为材料，在实验室前期研 hypogaea 究的基础上，对花生种子2s蛋白进行质谱鉴定、组成型分析和胰蛋白酶抑 制活性特点进行研究，并分析其在萌发过程中的动员情况。 本文建立了重复性、稳定性高的双向电泳系统，通过质谱分析鉴定了 h2的 2s蛋白各组分。2s蛋白均属于conglutin家族，2s一5、2s．4主要是Ara h6 各种异构体， 2s．3为Arah6的各种异构体，而2s．2、2s．1可能是Ara 降解形成的短肽。在天然状态下2s蛋白是复合蛋白，有两种存在形式。它 们分别是由多个分子量不同的亚基组成的，且是以Arah2和Arah6组合的 复合状态的形式存在的。2s蛋白在胶内活性检测中呈现两条明显的胰蛋白 酶抑制条带，其中第二条带的抑制活性较第一条带的抑制活性强，揭示了 2s蛋白的亚基组合状态对其抑制活性的强弱是有影响的。而在亚基状态下， 只有低分子量的2s蛋白才表现出抑制活性。还原剂导致2s蛋白易被降解和 抑制活性的降低或完全丧失，表明二硫键对2s蛋白构象和抑制活性的保持 具有重要作用。牛胰蛋白酶和重组人胰蛋白酶消化实验进一步提示了二硫键 2s-1 对2s蛋白构象和抑制活性维持的重要性，同时也进一步揭示了2s．2、 可能是通过酶解产生的短肽。 对萌发过程中花生子叶2s蛋白动员情况进行研究表明，2s含量随着种 子萌发时间的延长，其含量急剧下降。其中有两个比较关键的时期，一个时 期是萌发O～4d，另一个时期是萌发6--一12d。第一个时期，2s蛋白被迅速 动员，尤其是萌发2--4d，降解速率较大，萌发4d后2s蛋白就几乎被动员 完毕。随着花生种子的萌发，2s蛋白被逐渐降解，不管在天然状态还是亚 摘要 基状态，其胰蛋白酶抑制活性也逐渐被削弱甚至消失，降解产生的新片段也 无抑制活性。通过双向电泳分析表明，在花生萌发04d期间，2s．5两个蛋 白质点最早被动员，呈现不断下降的态势。2s．4、2s．3各蛋白质点表现出在 萌发初期(0~2d)，先有所增加，而后随着种子吸胀的加剧(2,--4d)，呈比 较明显的下降趋势。低分子量的2s．2两个蛋白质点在此期间变化较小，推 测因其具有一定的胰蛋白质抑制活性，对蛋白质酶消化有一定的抑制作用， 故在此期间量变化维持稳定。在花生萌发6~12d期间，2s几乎被动员完毕， 产生一些分子量小的新蛋白质点，这些蛋白质点在量上也没有太大的差异。