中国医科大学《生物化学》课件-第12章 DNA复制 20120509 简略版.pptVIP

本章内容 DNA复制基本概念和基本特征 DNA复制的酶和蛋白质 DNA复制的过程（原核细胞） 真核细胞DNA复制终止和端粒 DNA的损伤与修复 DNA复制的一般特征 以原来的DNA两条链作为模板，四种dNTP为前体，还需要Mg2＋ 作为模板的DNA需要解链 半保留复制 需要引物——主要是RNA 复制的方向始终是5′→3′ 具有固定的起点 多为双向复制，少数为单向复制 半不连续性 具有高度的忠实性和进行性 一、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 三、双向复制 多数原核和真核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 DNA复制起始区的特征 由多个短的重复序列组成； 能够被多亚基的复制起始区结合蛋白识别； 通常富含AT碱基对，这有利于DNA复制起动时的解链，因为AT碱基对含有的氢键数目低于GC碱基对。 三、DNA引发酶(引物酶) 是一种专门用来起动或引发DNA合成的酶，其实质是一种RNA聚合酶,能合成RNA引物. 由于DNA聚合酶本身不能起动多聚物的合成，只能延伸已经被起动的多聚物，因此，引发酶是DNA复制所必需的。 因为DNA复制的半不连续性，故引发酶在前导链上只需引发一次，而在后随链上则需用引发多次。 四、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 五、切除引物的酶 RNA引物只是用来起动DNA的复制，它最终并不存在于被复制的DNA分子之中，迟早要被除去，实际上，细胞内有专门的酶负责切除RNA引物。 原核细胞内切除RNA的酶是DNA聚合酶I或核糖核酸酶H （RNase H) 。 真核细胞负责切除RNA引物的酶是RNaseHⅠ/FEN1或FEN1/Dna2。 一、以大肠杆菌为代表的“θ-复制”系统 DNA复制的起始——起始于OriC的识别，结束于引发体的形成 DNA复制的延伸 （1）前导链合成 （2）后随链合成 DNA复制的终止和子代DNA的分离 二、真核细胞的DNA复制 真核细胞的DNA复制在很多方面与原核细胞极为相似，但也有几点不同于原核细胞的地方： （1）需要解决核小体和染色质结构对DNA复制构成的障碍； （2）复制叉移动的速度远低于原核细胞； （3）具有多个复制子，这可以弥补复制叉移动速度低对整个DNA复制速度的制约； （4）冈崎片段的长度小于原核细胞； （5）复制被限制在细胞周期的S期，并受到严格的调控； （6）在第一轮复制结束之前不可能进行第二轮复制，而原核细胞在第一轮复制还没有结束的时候就可以进行第二轮复制； （7）需要端粒酶解决染色体DNA末端复制问题。 “末端的烦恼” 当真核细胞的线性染色体DNA复制到一定阶段的时候，位于端粒处的冈崎片段上的RNA引物被切除以后，必然留下来一段空隙，该空隙无法通过DNA聚合酶直接填补，因为DNA聚合酶无法催化从3’-5’ 方向合成DNA。如果上述空隙不及时填补，端粒DNA越来越短，染色体DNA每复制一次，端粒DNA就少一段。 端聚酶的结构与功能 端聚酶也称为端粒酶或端粒末端转移酶，由蛋白质和RNA两种成分组成，其中蛋白质具有逆转录酶的活性，其三维结构与其它逆转录酶有明显的相似性，而RNA含有1.5拷贝的端粒DNA重复序列，这一部分序列作为逆转录酶的模板。不同来源的端聚酶在RNA长度上变化很大，但它们都形成特定的二级结构，作为模板的那一部分序列处于单链状态，以方便它与端粒区的重复序列结合，并有效地充当逆转录的模板。 端粒酶与细胞衰老和癌变的关系 端粒的长度并非固定不变，生殖细胞和肿瘤细胞端粒长度要比体细胞的端粒长很多 端粒酶活性的高低与端粒的长短有关 端粒缩短到一定长度的时候，细胞会死亡 DNA复制的高度忠实性 （1）四种dNTPs浓度的平衡 （2）DNA聚合酶的高度选择性 [遵守严格的碱基配对规律] （3）DNA聚合酶的自我校对 （4）使用RNA作为引物 （5）错配修复 反转录酶含有两个亚基：大亚基和小亚基 大亚基具有三个酶活性：（1）5‘→3’的依赖于RNA的DNA聚合酶活性，该活性用来催化负链DNA的合成；（2）核糖核酸酶H活性，该活性用来水解RNA引物和基因组