锦鲤及花鲫远缘杂交后代生物学特性研究.pdfVIP

分类号 密级 学校代码 10542 学 号2QQ墨!垒Q2QQ!鱼 锦鲤和花鲫远缘杂交后代生物学特性研究 Studiesonthe of biological thedistant betweenkoi and hybrids carp n ● 110WercruClan carD 指导教师姓名、职称 室!!尘芏塾撞 学 研 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一一年四月 摘要 选用锦鲤和花鲫进行远缘杂交，获得了鲤鲫Fl(锦鲤(旱)× 花鲫(6))和鲫鲤Fl(花鲫(早)×锦鲤(杏))两个杂交鱼群体。 本文采用可数性状测量、染色体制片、组织学切片及分子标记检测等 技术对上述杂交鱼的生殖细胞发育及相关遗传特征进行了系统的研 究，为鱼类远缘杂交的遗传育种研究提供了重要的生物学依据。主要 研究内容包括以下几点： 1、对鲤鲫F。和鲫鲤Fl及其父母本的外形特征进行研究，用统 计学的方法对它们的可量性状、可数性状进行比较，结果显示：大多 性状介于父母本之间，显示杂交性状。也有的性状在杂交后代中偏向 母本，如在体高／体长方面鲤鲫Fl、体长／全长方面鲫鲤Fl均偏向于母 本；而在尾柄高／尾柄长、头高／体高、头高／头长方面鲤鲫Fl和鲫鲤 Fl均偏向于锦鲤，鲫鲤F。的这些性状受父本锦鲤影响较大。杂交后 代体色具有多样性，鲤鲫Fl和鲫鲤Fl中均存在金黄色个体，同时还 有银白色等其它颜色个体。 2、以普通红鲫(2n=100)作为对照，用流式细胞仪快速检测鲤 鲫F1、鲫鲤F1代血细胞DNA相对含量。结果显示：鲤鲫Fl代全部 为二倍体，鲫鲤F1代中二倍体与三倍体比例为4：1；利用肾细胞直接 制片法对其染色体数目检测表明，鲤鲫F1代染色体数目为100，鲫 血细胞及其细胞核体积均为二倍体的1．5倍；有趣的是鲫鲤Fl三倍 体和母本花鲫一样口角无须，而鲤鲫Fl、鲫鲤Fl二倍体口角均有须。 3、精巢细胞直接制片法观察发现大部分是染色体数目为2n=100 性腺中有2n、4n等多种精原细胞，推测其中4n的精原细胞有可能经 正常的减数分裂产生二倍体配子，若卵巢中也能产生二倍体卵子，在 自交后代中就能得到四倍体鱼，同时也可以和其他的鲫鲤二倍体配子 结合，得到新型四倍体鱼。 微结构，发现鲤鲫F1、鲫鲤F1二倍体中均有卵巢型、精巢型和脂肪 型三种性腺。9月龄鲤鲫、鲫鲤卵巢型性腺中都能观察到I、II、Ⅲ 时相卵母细胞，发育好的精巢型性腺中能看到大量精细胞，鲫鲤Fl 中有部分精巢型性腺发育不好，只有极少数精细胞，观察发现鲫鲤 F】(3n)性腺发育异常。 5、利用Sox基因分子标记对鲤鲫和鲫鲤Fl代二倍体和三倍体及 其父母本进行检测，结果表明：鲤鲫、鲫鲤F，代二倍体和三倍体均扩 增带，鲤鲫F1和鲫鲤F1都兼有父母本的遗传物质，从分子水平证明 了其基因的异源性。克隆到的～900bp片段经比对发现为Sox9b基因， 以硬骨鱼Sox9基因HMG．box序列构建进化树，发现鲤鲫F1、鲫鲤 Fl与锦鲤、鲤鱼和异源四倍体鲫鲤Sox9b聚在一起。同时对克隆得到 的其他相关Sox基因序列，进行了核苷酸和氨基酸序列的比对，并进 行了生物信息学方面的分析。 以上结果说明锦鲤和花鲫远缘杂交F1兼有父母本性状，能在杂 交后代中得到颜色鲜艳的观赏鱼。性腺切片和性腺染色体观察结果表 明，锦鲤和花鲫远缘杂交能制备出不同倍性的杂交鱼，且杂交后代具 有产生二倍体配子的潜能，这为制备四倍体鱼提供了新途径。 关键词：锦鲤、花鲫、远缘杂交、多倍体、Sox基因