猪苓原生质体制备及细胞再生研究.pdfVIP

江苏农业科学 2008年第3期 一 167一 猪苓原生质体制备及细胞再生研究 彭 浩，邓百万，陈文强，刘开辉，解修超，丁小维 (陕西理工学院生物科学与工程学院，陕西汉中723001) 摘要：就猪苓原生质体制备的技术条件与细胞再生进行研究，结果表明，制备猪苓原生质体的最佳条件是采 用12 d菌龄的菌丝体，2．66％蜗牛酶+1．33％纤维素酶为酶解液，酶解温度28℃，酶解时间6 h，稳定剂为 0．010 9 g／ml甘露醇，pH值自然。在此条件下猪苓原生质体制备的产量为6．8 X 10。个／ml。分离原生质体细胞 再生频率为17．45％。 关键词：猪苓；原生质体；制备；再生 中图分类号：$646 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2008)03—0167—03 猪苓[Polyporus umbellate(Per．)Fries]属真菌 大量研究，而采用紫外线诱变猪苓原生质体尚未见 门，担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，猪苓属。别名野 报道。本研究就原生质体制备过程中菌龄、酶液种 猪粪，呈长形块状或不规则块状，半木质，稍扁，表面 类、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳定剂等影响因素 灰色或黑色，凹凸不平。我国的猪苓主要分布在河 进行分析，筛选出适合猪苓原生质体分离与再生的 北、陕西、山西、四川、湖北、云南等地l1 J。猪苓在我 条件，为猪苓原生质体诱变育种奠定基础，可选育猪 国已有2 000多年的药用历史，具有利水、渗湿、消 苓多糖含量高的菌株，培育优良品种，为更好地开发 肿、降低肝脏中过氧化脂质的含量、提高细胞中超氧 利用猪苓这一珍贵食药用菌资源奠定基础。 化物歧化酶和肝脏中过氧化氢酶的活性等功 1 材料与方法 效 J。尤其是猪苓多糖的发现和应用，引起了国 内外学者对猪苓研究的极大兴趣。从猪苓中提取的 1．1 材料 多糖成分，具有抑制肿瘤生长和增强荷瘤动物及肿 1．1．1 供试菌种 猪苓菌种由陕西省资源生物重 瘤病人机体免疫功能的作用，在治疗病毒性肝炎和 点实验室食药用菌种保藏中心提供。 抗辐射方面也有良好的效果 J。 1．1．2 培养基 (1)固体基础培养基(CPDA培养 由于野生猪苓被大量采挖，资源越来越少，国家 基)：马铃薯200．00 g，葡萄糖20．00 g，KH2PO 5．00 已将猪苓列为濒临枯竭的保护物种。20世纪70年 g，MgSO4·7H20 3．00 g，维生素 B 0．01 g，琼脂 代末，我国学者成功地从猪苓菌核中分离出猪苓纯 18．00g，加水至1 000 ml，pH值自然。(2)液体培养 菌种，开始了猪苓实验室离体培养研究；同时，我国 基：马铃薯200．00 g，葡萄糖20．00 g，KH2PO4 5．00 中医研究部门发现，利用猪苓菌丝体发酵液制备多 g，MgSO4·7H20 3．00 g，维生素B 0．01 g，加水至 糖有替代利用生药制备猪苓多糖的可能性 -8]。 1 000 ml，pH值自然。(3)再生培养基：在固体基础 通过菌丝发酵生产猪苓多糖与传统方法从菌核中提 培养基中加入o．010 9 g／ml的甘露醇渗透压稳 取多糖相比有很大的优势，具有不受季节限制进行 定剂。 工业化连续生产、规模大、产量高、发酵周期短、生产 1．1．3 酶解液 酶解液成分配组筛选设为6组，即 效益高等优点，但目前对猪苓菌丝发酵培养的有关 (1)2．00％纤维素酶；(2)2．00％蜗牛酶；(3)1．00％ 研究较少。 纤维素酶+1．00％