人参β-actin基因实时荧光定量mCo方法的建立=.PDF

·ORPM · 中草药 qea 第QR卷 第T期 OMQ年V 月 人参β 基因实时荧光定量 mo 方法的建立 侯双利，韩 梅，刘翠晶，杨利民G 吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 NPMNNU 摘 要：目的 建立人参βJ 基因实时荧光定量mo 的方法。方法 根据d 上其他高等植物βJ 基因保守区 域设计一对特异性引物，将从人参中mo 扩增得到的βJ 基因克隆到jaOMJq载体上构建重组质粒，经NLNM梯度稀释 后用于制定标准曲线，并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。 结果 该方法检测βJ 基因的最低拷贝数为QP 拷 T O 贝Lμi，在较广的范围内（QP～QKP×NM 拷贝Lμi）有良好的线性关系（o ＝MKVVR=P）；熔解曲线分析显示扩增产物为特异性单 峰，其 值为（UQKRN±MKMN）℃；R 个不同浓度对照品组内试验变异系数为MKRUB～OKTVB，组间试验变异系数为OKSNB～ QKQNB。结论 该方法具有快速、灵敏、特异、高通量及重复性强等优点，为βJ 基因作为内参基因进行人参功能基因表 达的定量分析提供了方法学基础。 关键词：人参；内参基因；基因克隆；实时荧光定量mo；pvo=d=f 中图分类号：oOUOKNO 文献标志码： 文章编号：MORP JOSTMEOMNQFNT=J ORPM=J=MQ alfW NMKTRMNLKKMORPJOSTMKOMNQKNTKMOM a oqmo β m elr=pJIekjIifr=JIvkd=iJ ===j=jI=g==rI==NPMNNUI= W l q===J===oqJmo = βJ = m K j ==βJ======dI======== =βJ====jaOMJq=====K=q===== =====K=q=I=I ===Ko q=== ======βJ=====QPK0 copies/μL, and there was a good linear rela= ====QP==QKP= NMT O copies/μL (o =Z MKVVR PFK=q==========EUQKRN= MKMNF ℃K=q====EsF=======MKRUB=OKTVB=OKSNB=QKQNB =J==JIK q=========I=I I==I ==I====== == ==mK βJ ======K hWm K=K=jX==X==XJ===moX=pvo=d=f 实时荧光定量 mo （J = 对定量，在相对定量检测中，对来自不同样本中特 mo，oqJmo）是OM 世纪VM年代兴起 定基因的ok 表达量进行比较分析时，理想的条 的一种准确、快速的核酸定量分析技术xNz，是定量 件是不同样品之间的起始细胞数目、ok 提取效率 xOJQz 研究基因表达最为有效的方法之一 。它是指在 及目的基因扩增效率等都相同，但实际上这些条件 xSz mo 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累 不可能同时得到满足 。因此，需要同时对不同样 实时监测整个mo 进程，最后通过标准曲线对未知 本中的内参基因进行定量mo，以此对目的基因的 xRz 定量结果进行校正。内参基因通常是指在不同发育 浓度的样品进行定量分析 。它分为相对定量和绝 收稿 日期：OMNQJMOJNS 基金项目：国家自然科学基金资助项目 （PNOTMPTN）；国家科技支撑计划项目（OMNN==fMPMNJMO）；吉林省科技成果转化项目 （OMNORMSU） 作者简介：侯双利 （NVUV—），吉林长春人，硕士研究生，主要从事药用植物分子生态学研究。 *通信作者 杨利民 qW=EMQPNFUQRPPOTS bJWTTT]NOSK 中草药 =q==e=a 第 R 卷 第 NT 期 =OMN 年 V 月 ·ORPN · 阶段和不同组织细胞中均恒定表达的管家基因，常用 O