微拟球藻原生质体制备与再生.PDF

微拟球藻原生质体制备与再生 1 1 2 1 1 马晓磊 , 张 琳 , 杨官品 , 朱葆华 , 潘克厚 (1. , 266003; 2. , 266003) 摘要: 综合考虑酶混合液处理时间和初始细胞密度两个因素, 选取终浓度为 4%半纤维素酶和 2%崩溃 酶的酶混合液对一株海洋经济微藻——微拟球藻(Nannochloropsis oculata)进行原生质体的制备与再生, Calcofluor White 染料染色可在荧光显微镜下观察到完整的原生质体细胞。实验结果表明: 同一初始密 度藻细胞酶处理 1~3 h 制备率较高; 酶处理相同时间较高初始密度(2×107~3×107 cells/mL ) 的藻细胞制 备率较高, 并且原生质体在再生培养基上可再生, 生长趋势与野生型细胞一致。考虑到酶处理时间过 长或者密度过大会对原生质体的再生产生影响, 本实验选择最适酶处理时间为 1h, 初始细胞密度为 2×107 cells/mL 。 关键词: 微拟球藻(Nannochloropsis oculata); 原生质体; 再生; Calcofluor White staining 中图分类号: P735 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2012)02-0019-05 , , , 1 材料与方法 , , , 1.1 实验试剂及仪器 , , , , (Hemicellulase) (Driselase) Calcofluor White Sigma , , : f/2 (0.2M KCl ) , (0.1% CaC12), 1.0%1.2% (Nannochloropsis oculata) 1.2 藻种培养 , , 25 µm[1-3], (Nannochloropsis oculata) [4] , (Australian CSIRO Collection of Living ,