电化学预处理玻碳电极微分计时电位溶出法测定DNA中的嘌呤碱基和DNA浓度.pdfVIP

Vol. 27 高 等 学 校 化 学 学报 No. ll 2 0 0 6 年ll 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2056 ~ 2060 电化学预处理玻碳电极微分计时电位溶出法 测定DNA 中的嘌呤碱基及DNA 浓度 贾文丽，李天华，张晶晶，王怀生 （聊城大学化学化工学院分析化学研究所，聊城252059 ） 摘要 研究了鸟嘌呤（G ）、腺嘌呤（A ）、鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷和变性DNA 在电化学预处理玻碳电极上的 恒电流微分计时电位溶出行为. 实验结果表明，用电化学方法预处理玻碳电极操作简单，效果明显，预处理 玻碳电极对嘌呤及其核苷和DNA 的吸附能力大大增强，用微分计时电位溶出法可以得到灵敏的溶出峰，溶 出峰高（d!/ d ）与其浓度在一定范围内呈良好的线性关系，可用于嘌呤碱基及其核苷的定量检测和DNA 浓 度的测定. 将该方法应用于酸变性DNA 样品中鸟嘌呤与腺嘌呤的同时测定，选择性好、灵敏度高；还可获 得有关DNA 损伤的一些信息. 关键词 DNA ；嘌呤碱基及其核苷；电化学预处理玻碳电极；计时电位溶出分析 中图分类号 O657 . l 文献标识码 A 文章编号 025l-0790 （2006 ）ll-2056-05 ［l］ DNA 的氧化性损伤一般发生在嘌呤碱基上，其中鸟嘌呤因具有最低氧化电位而最容易被氧化 . ［2 ，3 ］ ［4 ~ 6 ］ 检测体液中嘌呤及核苷的升高水平可以预测DNA 的损伤程度 ，指示某些疾病的发生 ，而且对 于研究 ［7 ］ DNA 的代谢过程及其损伤机理有一定的帮助. 早在40 多年前，Smith 等 用极谱方法分析检测 ［8 ］ 了嘌呤和嘧啶类化合物，Palecek 等 用阴极溶出伏安法考察了利用静汞电极检测低含量嘌呤和嘧啶 碱基的可能性； ［9 ，l0 ］ Percio 等 则利用鸟嘌呤或腺嘌呤与Cu 形成的配合物在静汞电极上的特性吸附实现 了碱基的痕量检测. 与以上方法相比，计时电位溶出分析法（CSA ）信噪比和灵敏度高、选择性好［ll，l2 ］， 在 ［l3 ］ ［l4 ］ DNA 测定及其杂交检测方面应用较多，但其工作电极主要是汞电极 、碳糊电极 及石墨印刷电 ［l5 ，l6 ］ 极 等. DNA 及其碱基在裸电极上的电化学响应较弱，而在电化学预处理玻碳电极上的响应信号则 大大增强［l7 ~ 20 ］，我们［l7 ~ l9 ］曾将预处理玻碳电极用于DNA 以及鸟嘌呤和腺嘌呤的同时测定，获得了满 意的结果. 预处理玻碳电极可以提高被测物质的电化学响应，但背景电流也同时升高，因此不利于测 定浓度较低的样品. 本研究通过电化学预处理方法增大了玻碳电极对嘌呤及其核苷的吸附作用，进而提高了电化学响 应，利用计时电位溶出法克服预处理玻碳电极背景较高的缺点，探索了玻碳电极用于DNA 、DNA 中鸟 嘌呤和腺嘌呤及其核苷含量测定的最佳条件，依据溶出峰高与DNA 及其嘌呤或核苷浓度之间的线性 关系定量测定DNA 或碱基，并进一步研究了DNA 损伤的直接电化学检测. 1 实验部分 1. 1 试剂与仪器 鸟嘌呤、