黏虫体内两种微管蛋白基因cDNA序列的克隆与序列分析.pdfVIP

艋物保 第34卷第4~(2oo8) ·40 · PLANT PROTECTION Vo1．34 No．4(2008) 黏虫体内两种微管蛋白基因cDNA 序列的克隆与序列分析 樊 东 。， 秦松柏 ， 朴冬花。， 许艳丽¨ (1．中国科学院东北地理与农业生态研究所，哈尔滨 150081； 2，东北农业大学农学院，哈尔滨 150030) 摘要 以黏虫4龄幼虫为材料提取总RNA，利用RT～PCR和eDNA末端快速扩增技术(RACE)，分别扩增得到该 虫的a和p微管蛋白基因的eDNA序列各1条。其中a微管蛋白基因的eDNA序列1 443个碱基，包括一个 1 353 个碱基的开放阕读框，编码一个含450个氨基酸的蛋白，分子量约为50．0ku。氨基酸的142～148位存在一个微管 蛋白标志信号片段GGGTGSG，在氨基酸序列的C一端有一个酪氨酸残基，N一端存在一个对转录后调控非常重要的 保守区MRECI序列，以上特点与其他昆虫a微管蛋白氨基酸序列相同。黏虫p微管蛋白基因eDNA序列含1 906 个碱基，开放读码框1 344个碱基，编码氨基酸447个，分子量约为50．2ku，等电点4．75。1～4个氨基酸MREI为p 微管蛋白转录后调控信号，14O～146GGGTGSG位同样存在一个微管蛋白标志信号片段。序列比对表明，克隆的a 和p微管蛋白基因与其他昆虫的a和p微营蛋白基因在核苷酸和氨基酸水平上都是高度同源的，黏虫与家蚕 (Bomby mori)a微营蛋白的氨基酸序列同源性达到99．3 ，与其他3种夜蛾科昆虫a微管蛋白的氨基酸序列同源 性更是达到100 。黏虫与家蚕p微管蛋白的氨基酸序列同源性达到98．7 ，与烟草天蛾 p微管蛋白的氨基酸序 列同源性达到99．6 。两个基因的eDNA序列已经登录GenBank并获得登录号分别为EU100016和 EU234504。 关键词 黏虫； a微管蛋白； p微管蛋白； 克隆； 序列分析 中图分类号 Q 785。S 433．4 Cloning and sequence analysis of two types of tubulin genes from the armyworm，Mythimna separata Walker Fan Dong ， Qin Songbai ， Piao Donghua ， Xu Yanli (1．Northeast Institute of Geography and Agricultural Ecology，Chinese Academy of Sciences， Harbin 150040，China； 2．Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China) Abstract Tota1 RNA was isolated from the forth instar 1arvae of the armyworm，Mythimna separata Walker．An a and a 8 tubulin cDNA sequences were cloned by RT—PCR and rapid amplification of eDNA ends(RACE)．The a tu— bulin eDNA sequence is 1 443 bp，which contains an open reading frame of 1 353 bp and encodes a polypeptide of 450 residues with a predicted molecular weight of about 50．0ku．There is a tubulin signature sequence GGGTGSG at the sites 142～148 of the deduced amino acid sequence．The C-termina1