机械生长因子实时荧光定量RT-PCR检测方法研究.pdfVIP

上海体育学院学报 第 卷第 期 年 月 年 月出版 运动人体科学 机械生长因子实时荧光定量检测方法研究 肖卫华 陆耀飞 上海体育学院运动科学学院上海 摘 要 目的建立机械生长因子基因表达的实时荧 是兴奋剂检测的重点和难点作为自身产生的多肽类物 光定量方法 方法应用实时定量法检测腓 质当前对它的检测尚无有效手段 因此开发一种兴奋 肠肌中基因表达 结果及结论荧光定量法能 剂的基因检测方法是必要的 本研究正是基于此目的而展开 绝对定量兴奋剂基因表达水平相关系数大于 探索一种能绝对定量基因表达的方法 关键词机械生长因子信使核糖核酸荧光定量 研究对象与方法 检测方法 研究对象 中图分类号 文献标志码 周龄健康雄性 小鼠 只体重 文章编号 购于上海西普尔必凯实验动物有限公司 戊巴比妥 钠 体重腹腔注射麻醉断头处死后立即分离左右 后肢腓肠肌并迅速置于抽提液中并高速匀浆进行总抽 提并反转录用于定量分析 抽提与反转录 使用异硫氢酸胍氯仿经典法抽提总 主要试剂 购自 公司氯仿异丙醇购自上海增建 生物科技有限公司 按照 第一链 合成试 剂盒把 用作模板合成 试剂盒购 自 公司 在 管中进行反转录反应 总体积 反转录反应条件为 冷却至 合成 的储存在 备用 标准品的制备 根据 数据库中公开发表的基因序列设计目的基 因 的标准品引物 上海生工公司合成 机械生长因子 是近年来发 标准品上游序列 下游序列 现的胰岛素样生长因子 的剪接异构体它与肝脏 进行 管常规同时扩增 产生的系统型 具有不同的结构和功能 且不经