用于核酸损伤与化合物基因毒性检测的新型DNA电化学传感器.pdfVIP

维普资讯 生 态 毒 理 学 报 Vo1．1．No．1 第 1卷第 1期 2006年 3月 AsianJournalofEcotoxicology Mar．2OO6 用于核酸损伤和化合物基 因毒性检测的新型 DNA 电化学传感器 韦明元 1,2，郭 良宏 l，陈浩 1．中国科学院生态环境研究中心 环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京 100085 2．华中农业大学理学院化学系 武汉 430070 摘要 ：利用 电化学方法检测 DNA损伤和污染物基 因毒性具有重要意义．根据分子膜层层 自组装 的原理 ，将受化学损 伤的小牛胸腺 DNA固定于氧化铟锡电极表面 ，制备出核酸传感器界面 ．使用 DNA嵌入剂二联吡啶二吡啶并 [3，2． a；2’，3’．c]吩嗪钌 [Ru(bpy)dppzz]作为电信号指示剂 ，与核酸膜结合后 ，进行电化学检测 ．由于嵌入剂具有很 高的DNA结合能力和双链特异性 ，与 DNA的结合数量在损伤前后发生变化．在电化学检测中，采用 已研究成功的高 倍数信号放大机制 ，用电子给予体草酸还原 Ru(bpy)dppzn，使之循环产生电流信号．这样 ，嵌入剂与DNA结合数 目的 微量变化得到灵敏检测．在工作中，分别采用石英晶体微天平和电化学方法对 DNA的表面固定进行 了表征 ，计算出未 损伤 DNA的固定量为3．2ng·mm～，损伤DNA的固定量为 4．2ng·mm～．对两种核酸膜进行电化学检测 ，发现在信号放 大剂草酸溶液中，损伤 DNA的电流信号显著高于未损伤DNA，前者是后者的 2．2倍．通过荧光分析 ，得到 Ru(bpy) dppz2与损伤 DNA的结合常数 (K=1．07×107M )和结合比(0．68)．嵌入剂与损伤 DNA结合物的荧光强度是未损伤 DNA 的 1．5倍 ，说明损伤后嵌入剂结合量增加 了1．5倍．损伤 DNA电化学检测信号增高的主要原因是 由于信号指示剂嵌入 电极表面核酸数量的增加．利用高结合能力、高选择性 的电化学嵌入剂 ，结合高倍数信号放大机制 ，可 以对核酸损伤进 行灵敏检测． 关键词：核酸损伤 ；基因毒性 ；电化学 ；生物传感器 ；嵌入剂 文章编号 ：1673—5897(2006)1—080—08 中图分类号 ：X502 文献标识码 ：A ElectrochemicalDNA Sensor for the Detection ofDNA Damage Chemi cal Toxicity WEIMing—yuan。，GUO Liang—hong。，，CHEN Hao 1．State Key Laboratory ofEnvironmentalChemistry and Ecotoxicology，Research CenterforEco—enviromn entalSciences ， ChineseAcademyofSciences，Beijing100085 2．CollegeofSc ience，Huazhong A cultural University，Wuhan 430070 Received 17 Feburary 2006 received in revised ofrm 6 March 2006 accepted 7 March 2006 Abstract：DNA damagecanbeformedthrouIghreactionswithenvironmentalpollutantsdirectlyorindirectly ．