苹果 MdRCD1 基因的表达分析以及功能的初步鉴定.PDFVIP

果 树 学 报 2017，34（5）：525-533 JournalofFruitScience DOI:10.13925/ki.gsxb 苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定 * * 李浩浩，曲丰佳，安建平，李 睿，郝玉金，王小非 ，由春香 （山东农业大学园艺科学与工程学院·作物生物学国家重点实验室·农业部黄淮地区 园艺作物生物学与种质创制重点实验室，山东泰安 271018） 摘 要：【目的】分离克隆苹果MdRCD1基因，分析其蛋白结构和逆境响应，并初步鉴定MdRCD1在苹果愈伤中的功 能。【方法】同源克隆MdRCD1并测序，用DNAman和MEGA5相关软件分析MdRCD1氨基酸序列以及进化关系，不同逆 境处理‘嘎拉’苹果组培苗，qRT-PCR分析MdRCD1在逆境条件下的表达量。农杆菌介导的遗传转化方法获得过量表 达MdRCD1的转基因愈伤，不同盐浓度处理野生型和转基因愈伤，观察愈伤的长势，检测愈伤的鲜质量、脯氨酸和丙二 醛含量，鉴定MdRCD1的初步功能。【结果】从‘嘎拉’苹果中克隆了MdRCD1(MDP0000234325)基因。该基因ORF为 1803bp。通过进化树和蛋白同源性分析，表明苹果MdRCD1和中国白梨PbRCD1进化亲缘关系最近。在MdRCD1的 N端有1个保守的WWE结构域，1个PARP催化中心，在C端有1个RST结构域。qRT-PCR实验表明MdRCD1在苹果各 个组织器官中都有表达，在茎中的表达量高于其他组织；同时MdRCD1的表达受NaCl、ABA、渗透胁迫等逆境胁迫的诱 导。通过农杆菌侵染获得过量表达MdRCD1转基因苹果愈伤。盐胁迫处理条件下，过量表达MdRCD1的抗性明显提 高。【结论】MdRCD1在进化过程中比较保守，苹果不同组织中都有表达，过量表达MdRCD1苹果愈伤的抗盐性得到提高。 关键词：苹果；MdRCD1；基因克隆；表达分析；盐胁迫 中图分类号：S661.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980(2017)05-0525-09 Expressionanalysisandpreliminaryfunctionalcharacterizationofthe appleMdRCD1 LIHaohao，QUFengjia，ANJianping，LIRui，HAOYujin，WANGXiaofei ，YOUChunxiang* * (CollegeofHorticultureScienceandEngineering,ShandongAgriculturalUniversity·StateKeyLaboratoryofCropBiology,MOAKeyLabora⁃ toryofHorticulturalCropBiology(HuanghuaiRegion)andGermplasmInnovation,Tai’an271018,Shandong,China) Abstract：【Objective】Plantsareconstantlyexposedtoabroadspectrumofbioticandabioticstresses duringgrowthanddevelopmentinnature,suchassalt,drought,coldandoxidation.Inordertoadaptto the environment, plants have developed versatile stress-response mechanisms. Recent studies have shownthatSROs(SIMILAR-TO-RCD-ONE)playimportantrolesinresponsetostressesindiversespe⁃ cies.SROshavebeenidentifiedaspositiveregulatorstoprotectplantsfromoxidationandsaltdamage. However,thefunctio