细胞周期检测试剂盒.PDFVIP

细胞周期检测试剂盒 Cell Cycle Detection Kit 说明书修订日期：2014.07.11 产品编号：KGA511-KGA512 储存条件：Store at -20℃, protected from light For Research Use Only 一、试剂盒说明 细胞周期（cell cycle ）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过 程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可 以分为间期（interphase ）和有丝分裂期(M phase)，细胞间期又常划分为休眠期（G ）,DNA 合成前期（G ）， 0 1 DNA 合成期（S ），DNA 合成后期（G ），整个周期可表示为G →S→G →M。DNA 周期检测可用来反应 2 1 2 细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。利用细胞内DNA 能够和荧光染料（如碘化丙啶PI）结合的特 性，细胞各个时期其DNA 含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。 细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。 0 在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90 角光散射的能力增加或没有变化。在细胞 凋亡的晚期，前向角和900 角光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡 细胞。用 PI 对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA 量降低，于正常G /G 细胞群前出现DNA 低染细胞群， 0 1 即G 峰前出现亚二倍体峰（sub-G ），细胞凋亡群。 1 1 本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA 含量（细胞周期）检测。 二、试剂盒组份 组份 KGA511 KGA512 储存条件 20 assays 50 assays RNase A 2.0mL 5.0 mL -20℃ Propidium Iodide （PI） 8.0mL 20.0mL 2-8℃避光 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube、70 ％乙醇、PBS 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Propidium Iodide （PI）避光保存及使用，PI 有毒，操作时请戴手套。 五、操作方法 1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞； 6 2. 用PBS 洗涤细胞一次（离心2000rpm，5min ）收集并调整细胞浓度为1×10 /ml ，取1ml 单细胞悬液； 3. 制备的单细胞悬液离心后，去除上清，在细胞中加入体积分数为70 ％冷乙醇500ul 固定（2 小时至过夜）， 4℃保存，染色前用PBS 洗去固定液；（如需要，细胞悬液用200 目筛网过滤一次）； 4. 加100μL RNase A 37℃水浴30min； 5. 再加入400μL PI 染色混匀，4℃避光30min； 6. 上机检测，记录激发波长488nm 处红色荧光。 凯基相关产品 （详见凯基网站） 细胞株、细胞提取物及细胞培养产品 