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实验十 生防细菌鉴定和抗菌能力测定
2010.05. 11 ;生防细菌的纯化培养
生防细菌的分子鉴定
生防细菌的抗菌谱及抗菌能力测定;生防细菌的纯化培养
抗菌谱的测定准备 ;生防细菌的液体摇瓶培养
抗菌谱的测定;生防细菌的分子鉴定 16SrDNA 是编码原核生物核糖体RNA小亚基16SrRNA 的基因，与细菌整个基因组的变化相比，它具有高度的保守性，其变化的概率与细菌的变异和进化程度是一致的，所以有助于细菌的鉴定和分类。结合完善的数据库，16SrDNA 序列分析可以快速准确的对细菌进行种属鉴定，确定细菌在进化中的位置。
16SrDNA 序列包含10个可变区和与之相间的11个恒定区。根据恒定区的保守性可以设计出细菌的通用引物，并且扩增出所有细菌的16SrDNA 片段。可变区因细菌而异，能够揭示生物物种特征核酸序列，是种属鉴定的分子基础。;（二）细菌的16S rRNA分子鉴定
反应体系：在一个PCR管中用微量移液枪依次加入：
Taq buffer（10×）????????????????? 5ul
MgCl2 1 ul
dNTP??????????????????? 2.5 ul
Primer K1+K2????? 2 ul
ddH2O?????? ???? 39 ul
用灭菌小枪头挑取单菌落于PCR管中，使菌体悬浮于反应体系中。
rTaq（2U/ul）? ????????????????????????? 0.5ul
PCR反应条件：95℃预变性5 min后，95℃变性1 min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共25个循环，72℃延伸10min。
;抗菌谱结果观察
生防菌抗菌能力测定 ;取1mL生防菌菌液，于1.5mL离心管中。;观察抑菌圈的产生，并测量其半径
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