黄颡鱼甘露糖受体基因的克隆和功能分析.PDFVIP

第41 卷 第 7 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 7 2017 年 7 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA July, 2017 文章编号: 1000-0615(2017)07-1036-08 DOI: 10.11964/jfc.20160410350 黄颡鱼甘露糖受体基因的克隆和功能分析 1,2 1,2 2 1,2,3* 1,2,3,4* 刘小玲 ， 王 虹 ， 樊启学 ， 兰江风 ， 林 蠡 (1. 华中农业大学水产学院，水生动物医学系，湖北 武汉 430070; 2. 华中农业大学水产学院，淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，湖北 武汉 430070; 3. 华中农业大学水产学院，池塘健康养殖湖北省工程实验室，湖北 武汉 430070; 4. 华中农业大学水产学院，农业部淡水生物繁育重点实验室，湖北 武汉 430070) 摘要：甘露糖受体(MR)隶属凝集素超家族，主要表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞 表面。MR 不仅在先天免疫防御中发挥重要作用，还通过参与抗原呈递，激活T 淋巴细 胞，启动获得性免疫应答过程。本研究采用同源克隆技术获得黄颡鱼甘露糖受体 (pfMR )基因，采用荧光定量PCR技术检测MR在正常黄颡鱼体内的分布情况，采用鲖爱德 华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞和甘露聚糖封闭MR方法研究黄颡鱼MR在抗细菌感染中的 作用。结果显示，pf MR 同团头鲂、草鱼、斑马鱼和尼罗罗非鱼的MR聚为一支。pfMR 在 所检测的12个组织中均有分布，其在肾脏、脾脏和肌肉组织中表达量较高，在血液中表 达量较少。鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞后，pfMR 、IL-1β 和TNF-a均被细菌诱导 表达，超氧阴离子和一氧化氮的含量也上升，超氧阴离子在感染30 min后即显著上升， 一氧化氮在感染12 h后才显著上升。甘露聚糖竞争结合MR ，显著抑制巨噬细胞内化 GFP标签的鲖爱德华菌，加入EDTA减少内化的荧光强度，加入Ca2+使内化的荧光强度回 升。研究表明，黄颡鱼头肾巨噬细胞MR参与鲖爱德华菌的识别和内吞过程，而且依赖 Ca2+ 。 关键词: 黄颡鱼；甘露糖受体；鲖爱德华菌；超氧阴离子；一氧化氮 中图分类号: Q 785 ；S 965 文献标志码: A 甘露糖受体(mannose receptor ，MR)是一种 原生物入侵机体过程中产生的代谢产物，启动 跨膜糖蛋白，属于C型凝集素家族，不仅表达于 先天免疫反应，或通过提呈抗原启动获得性免疫 巨噬细胞和树突状细胞，还在肝脏内皮细胞、 应答。人巨噬细胞MR参与对白色念珠菌(Candida 视网膜上皮细胞、脑神经细胞以及精子等多种 albicans) 、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii ) 、 [ 1] 类型的细胞上表达 。MR是重要的模式识别受 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis) 、杜诺 体和内吞受体，可以识别多种内源性和外源性