第二章 生产中常用菌种分离、选育与保藏.pptVIP

第二章 发酵工业常用微生物及培养;第二章 发酵工业常用微生物及培养;带图象分析系统的微生物菌种显微观察装置 ;2. 1 菌种的分离;生产菌不是病原菌及其产物无毒性 原料来源广、廉价，菌种大量高效地合成产物 菌种纯，遗传性能稳定，不易感染噬菌体 生长繁殖能力强，发酵周期短 发酵中少产与产品相近的副产品 ;二、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 ;定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。; （一）采样;;（二）增殖培养;（三）分离筛选;（四）发酵性能测定;四、自然界中细菌的分离;采样的注意事项;采样和采集方法;1．土样采集方法;2．水样采集方法;２.２　菌种选育;1. 自然选育;2 诱变育种;一、诱变剂;　　　　　　　 化学诱变剂 化学因子如碱基类似物、5—氟尿嘧啶、烷化剂等。化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂。 大部分诱变剂是致癌剂，所以在使用中必须非常谨慎，要避免化学诱变剂与皮肤接触，且切勿吸入其蒸气，有人对某些诱变剂极其敏感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。 ;二、诱变育种流程 出发菌株 取高产斜面 　　　　　　　　　　　　　　（菌种保藏） 单孢子悬液 转接斜面 诱变处理 摇瓶复筛 稀释涂布平皿 　　高产菌株 单菌落转接斜面 中试考查 摇瓶初筛 生产;一、转 化;基 因 重 组 示 意 图; 杂交育种;原生质体融合;突变型菌株的筛选 ;２.３菌种保藏及防止衰退的措施;保藏原理：根据菌株生理生化特性，人工创造条件（低温、干燥、真空）使菌体的代谢活动休眠期状态。 目的要求：经长期保藏后菌种存活健在，保证菌种不改变表型和基因型，特别是不改变菌种代谢产物生产能力。 ;⑴ 冷冻保藏 ;① 普通冷冻保藏技术(-20℃) 保藏方法：将菌悬液或斜面培养物细胞将菌种加入菌种保护剂，密封于试管内，贮藏于冰箱的冷藏室或普通冰箱(-20℃)中。 保藏期限：1—2年 注意事项：经次解冻的菌株不宜二次保藏；保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试管应严格密封；不适宜多数微生物的长期保藏。;② 超低温冷冻保藏技术(-60－-80℃) 保藏方法：取对数生长中期至后期的微生物细胞；用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；混匀后分装入冷冻管中，于-60℃超低温冰箱中保藏。 保藏期限：5年 注意事项：冷冻速度控制在1-2℃／min; ; 复苏方法：从液氮罐中取出所需的安瓿，立即冰浴10min；再迅速将安瓿置于37-40℃水浴中，轻摇融解；取0.1-0.2ml 转接入琼脂斜面上。 保藏期限：10年以上 注意事项：保护剂最终浓度为10％无菌甘油或5％无菌二甲亚砜。甘油为高压蒸汽灭菌，二甲亚砜最好为过滤灭菌。 ;⑵ 冻干保藏 ;(3)传代保藏 保藏方法：将菌种定期在新鲜琼脂斜面基本培养基上传代， 5℃以下保藏 保藏期限： 1-3月 注意事项：此法简单和经济，可用于实验室中若干菌种的保藏；但易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变，应加以防治。不适宜作工业生产菌种的长期保藏方法。 ; （4）矿物油中浸没保藏 保藏方法：将琼脂斜面或液体培养菌种物浸入无菌矿物油中于室温下保藏，此方法简便有效，可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏 保藏期限： 1-3年 注意事项：以液体石蜡保藏时，应对菌株预先作石蜡培养试验，保藏株2～3年也应做一次存活试验。;(5)载体吸附于燥保藏;二、 微生物活力和稳定性测定 ;三、防止菌种衰退的措施;２.４　培养基的配制;1 概述;2 培养基的成分;1. 碳源 构成微生物细胞和代谢产物中碳素的营养物质，是发酵的主要原料之一 一般占干物质50% ，为生命活动提供能源 包括糖类，脂肪，有机酸，醇，碳氢化合物 ;①糖 类 单糖 葡萄糖 双糖 蔗糖，乳糖，麦芽糖 多糖 糊精，淀粉及其水解液，玉米淀粉， 马铃薯淀粉，小麦淀粉，木薯淀粉， ②脂 肪:可作碳源，还有消泡作用 ③有机酸:可作碳源，还有调节pH值的作