04DNA纯度浓度分析.ppt

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04DNA纯度浓度分析

实验四 DNA的纯度、浓度分析 ;1、实验目的 : 结合琼脂糖凝胶技术与紫外分光光度法检测基因组DNA的纯度、浓度,分析DNA质量。 学习使用核酸蛋白定量仪 ;2、实验原理: (1)DNA浓度测定 DNA或RNA在260nm处有最大的吸收峰。因此,可用260nm波长进行分光测定DNA或RNA浓度,OD值为1相当于大约50μg/ml的双链DNA、40μg/ml的单链DNA或RNA、33μg/ml的单链寡核苷酸。如用1cm光径,用H2O或TE稀释DNA样品若干倍并以H2O或TE为空白对照,根据读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度: DNA含量(ug/ul)=50×OD260读数×稀释倍数/1000;(2)DNA纯度测定 DNA纯品的OD260/OD280为1.8,RNA为2.0,因此根据OD260/OD280的比值可估计DNA或RNA的纯度。根据经验,当样品的OD260/OD280为1.8-2.0左右时,即认为已达到所要求的纯度。若比值较高说明含有RNA或RNA降解,比值较低说明有残余蛋白质甚至酚等存在,不能准确定量???

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