丹参药材指纹图谱建立方法研究.docVIP

　　丹参药材指纹图谱建立方法研究 崔同欣刘将纪亚楠 （上海华源安徽锦辉制药有限公司，安徽阜阳236018） 摘要：在目前已知的丹参及其制剂成分检测方法的基础上，主要对丹参水溶性成分的指纹图谱建立方法进行了初步探究，通过试验建立了丹参药材水溶性成分指纹图谱检测的试验条件和方法。 .jyqkiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。秋季9—10月份采挖，除去泥沙，干燥。 丹参药材中有效成分主要分为两类：一类为水溶性的酚酸类成分（丹参素、原儿茶醛和丹酚酸A、B、C等），另一类为脂溶性的二萜类成分（丹参酮I、丹参酮II和隐丹参酮等）。定性鉴别上述两类成分或定量测定其某种或多种有效成分含量，已成为评价丹参及其制剂质量的重要方法[1]。据统计，丹参制剂达100多种，而丹参制剂中主要有效成分为水溶性的酚酸类成分，考虑到原药材的质量控制与制剂质量之间的相关性，我们主要对丹参药材水溶性酚酸类成分进行了指纹图谱的研究，该类成分对紫外线具有较强的吸收值，可采用HPLC-UV法建立制剂指纹图谱。 1丹参指纹图谱研究情况 1.1脂溶性成分的指纹图谱 丹参脂溶性成分的指纹图谱，一般将药材经处理提取后，以甲醇-水溶剂系统进行梯度洗脱。由于丹参药材、对照品以及使用仪器等条件的不同，洗脱系统存在差异。徐德然[2]等以丹参酮ⅡA、隐丹参酮为对照进行指纹图谱研究。 目前获取指纹图谱的主要方法有色谱法、光谱法、X射线衍射法和分子生物技术等。其中，色谱技术是近年来分析化学领域中发展快、应用广的方法之一。常用的色谱技术包括薄层色谱、液相色谱、气相色谱和毛细管电泳等[3]。其中，高效液相色谱是液相品，5%甲醇与0.1%乙酸-甲醇梯度洗脱，在254nm波长处检测，用于不同产地丹参脂溶性成分指纹图谱的比较研究。 1.2水溶性成分的指纹图谱 近10年来，采用HPLC法分析技术对水溶性酚酸类化合物进行指纹图谱研究有显著的优势。研究中一般采用C18柱，甲醇或乙腈同时加入酸抑制剂进行线性梯度洗脱，分离效果较佳。周欣[4]等以丹参素钠、原儿茶醛为对照品，乙腈-0.4%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长254nm，建立了贵州铜仁地区丹参药材的HPLC水溶性共有指纹图谱；宋敏[5]采用甲醇-1.0%冰醋酸溶液梯度程序洗脱，以丹参对照药材制备指纹对照品进行了色谱系统适用性试验，并考察了梯度洗脱程序、流动相酸度以及色谱柱填充剂对指纹图谱重现性的影响。 1.3有效成分的指纹图谱研究 随着丹参指纹图谱研究的深入，丹参有效成分（脂溶性和水溶性）指纹图谱的研究也日益成熟。鉴于药材的有效成分理化性质差异较大，实际操作中，多采用水提、不同浓度甲醇提取等方法，以含酸抑制剂的乙腈或甲醇为流动相，建立丹参有效部位指纹图谱定性研究的分析方法。 刘艳华[6]等采用水提法，以原儿茶醛为外标，1%冰醋酸和1%冰醋酸甲醇溶液梯度洗脱，检测波长270nm，建立了河南灵宝地区丹参药材的指纹图谱；郑晓珂[7]等以甲醇-0.5%冰醋酸梯度洗脱，流速0.8mL/min，检测波长281nm，柱温35℃，建立了丹参药材的指纹图谱；黎琼红[8]等采用甲醇为溶剂进行索提后，以丹参酮ⅡA、原儿茶醛、丹参素钠为对照品，0.02%磷酸乙腈-0.02%磷酸梯度洗脱，40℃柱温，检测波长280nm，建立了丹参药材的高效液相指纹图谱；刘洋[9]等采用水回流提取后甲醇超声的方法，以丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA为对照品，用0.1%三氟乙酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱，检测波长270nm，柱温30℃，在同一图谱中同时建立起水溶性成分和脂溶性成分的指纹图谱。 1.4其他方法 近些年来，随着毛细管电泳（HPCE）、高速逆流色谱（HSCCC）及HPLC-MS联用技术的发展，这些技术已经被用于丹参指纹图谱的研究。 季一兵[10]等用毛细管电泳技术，采用50μm×50cm未涂渍毛细管柱，20mmol/L硼砂溶液作缓冲液，运行电压为15kV，检测波长210nm，建立了丹参中药材的HPCE指纹图谱；顾铭[11]等采用HSCCC法，以正己烷-乙醇-水体系采用分步洗脱，建立了丹参药材中脂溶性成分的HSCCC指纹图谱；陈勇[12]等应用电喷雾-质谱（ESI-MS）技术研究了原儿茶醛和丹参素的ESI-MS规律，并对丹参药材中已知的18种水溶性成分中的5种进行了质谱检测和电喷雾行为探讨，初步制定了丹参药材的水溶性成分的特征图谱。此外，汪红[13]等以丹酚酸B为指标，以0.5%甲酸-乙腈为流动相，检测波长287nm，得到其LC-MS（n）特征图谱，同时对图谱中7种主要化合物进行了精确归属，初步探讨丹酚酸成分的ESI-MS（n）规律。 徐曼[14]等还应用对照品对照和高效液相色谱-质谱联用技术对丹参注射液中的主要成分进行了定性分析，测定了18个不同